鞭毛染色法及活菌活动性观察.pdf

鞭毛染色法及活菌活动性观察 一、实验目的及要求  了解细菌鞭毛染色的原理，掌握鞭毛染 色的方法；学习用压滴法观察细菌的运动 性。 二、实验原理  细菌的鞭毛极纤细，直径一般为0.1—0.2um，只 有用电子显微镜才能观察到。但是，如采用特殊 的染色法，则在普通光学显微镜下也能看到它。  鞭毛染色的基本原理是：即在染色前先用媒染剂 处理，让它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然 后再进行染色。  常用的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等配 制而成。  采用鞭毛染色法虽能观察到鞭毛的形态、着生位 置和数目，但此法既费时又麻烦。如果仅须了解 某菌是否有鞭毛，可采用悬滴法或压滴法直接在 光学显微镜下检查活细菌是否具有运动能力，以 此来判断细菌是否有鞭毛。此法较快速、简便。  悬滴法就是将菌液滴加在洁净的盖玻片中央，在 其周边涂上凡士林，然后将它倒盖在有凹槽的载 玻片中央，即可放置在普通光学显微镜下观察。  压滴法是将菌液滴在普通的载玻片上，然后盖上 盖玻片，置显微镜下观察。 三、实验器材  1.菌种：苏云金芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、铜绿 假单细胞菌  2.染色液和试剂：硝酸银染色液、香柏油、二甲 苯、0.01％美兰水溶液。  3.仪器、材料：载玻片、擦镜纸、吸水纸、记号 笔、镊子、接种环，显微镜。 四、实验方法 （一）硝酸银染色法  1.清洗玻片 选择光滑无裂痕的玻片，置洗衣粉过滤液中 （洗衣粉煮沸后用滤纸过滤，以除去粗颗粒），煮沸20min。 取出用清水冲洗，沥干水后，置95%乙醇中浸泡，用时取出 在火焰上烧去酒精。  2.菌液的制备：菌龄较老的细菌容易失落鞭毛，所以在染 色前应将待染细菌在新配制的牛肉膏蛋白胨培养基斜面上 连续移接3-5代，以增强细菌的运动力。最后一代菌种放恒 温箱中培养12—16h。然后，用接种环挑取斜面与冷凝水交 接处的菌液数环，移至盛有1—2mL无菌水的试管中，使菌 液呈轻度混浊。将该试管放在37℃恒温箱中静置10min （放 置时间不宜太长，否则鞭毛会脱落），让幼龄菌的鞭毛松 展开。  3.制片：吸取少量菌液滴在洁净玻片的一端，立即 将玻片倾斜，使菌液缓慢地流向另一端，用吸水纸 吸去多余的菌液。涂片放空气中自然干燥。  4.染色  ①滴加A液，染3-5min；②用蒸馏水充分洗净A液；  ③用B液冲去残水，再加B液于玻片上覆盖染色数秒 至1min，必要时在酒精灯微火加热直至显褐色，立 即用蒸馏水洗，自然干燥。  5.镜检：先低倍，再高倍，最后用油镜检查。  菌体呈深褐色，鞭毛呈浅褐色。  （二）压滴法  1.制备菌液：从幼龄菌斜面上，挑数环菌放在装有1－2mL 无菌水的试管中，制成轻度混浊的菌悬液。  2.取2 －3环稀释菌液于洁净载玻片中央，再加入一环 0.01%的美蓝水溶液，混匀。  3.用镊子夹一洁净的盖玻片，先使其一边接触菌液，然后 慢慢地放下盖玻片，防止产生气泡。  4.镜检：将光线适当调暗，先用低倍镜找到观察部位，再 用高倍镜观察。要区分细菌鞭毛运动和布朗运动，后者只 是在原处左右摆动，细菌细胞间有明显位移者，才能判定 为有运动性。 五、实验报告  绘图表示鞭毛细菌的形态特征，并用箭头表示其 运动方向。 六、思考题  1.鞭毛染色法准确鉴定细菌是否具有鞭毛要注意 的细节。  2.压滴法中，发现视野内大量的细菌朝一个方向 运动，原因何在？