凋亡相关斑点样蛋白ASC真核表达质粒的构建及表达_袁媛.pdf

32 8 　军事 学科学院院刊　2010 年 8月 第 34 卷第 4期　, 34, 4, , 20 10　 凋亡相关斑点样蛋白 真核表达质粒的构建及表达 1, 2 # 2 1 2 袁　媛 , 宋　婷 , 黄　蓓, 钟　辉 [摘要]　目的　构建凋亡相关的斑点样蛋白(--, )真核表 达质粒。方法　从人胚肾细胞系 29 3细胞的总中经过逆转录和 获得 的全长双链片段, 经过酶切后连接到真核表达载体 3/中, 挑选出转化生成的阳性克隆测序, 将序列正确的重组质粒命名为 3/-。脂质体转染 3/-质粒到 29 3细胞中, 用印迹检测目的蛋白的表达。 同时用免疫沉淀和免疫印迹方法检测 蛋白与前半胱天冬酶(-)-1 的相互作用, 并用 方法检测 蛋白对 -1β 分泌的影响。结果　印迹实验证明 3/-可以在 293细胞中表达 , 并且可以与 --1结合, 使-1β分泌明显降低。结论　构建了重组质粒 3/-, 在细胞中 表达 后具有与 --1结合的能力, 并具有降低 -1β分泌的生物活性。 [关键词]　凋亡调节蛋白质类;真核细胞;白细胞介素 1β;质粒 [中图分类号]　753 [文献标志码]　 [文章编号]　1000-5501(20 10 )04 -032 8-04 - - () 1, 2# 2 1 ＊ 2 ＊ , , , (1., , 230039, ;2., 100850, ) ＊, , -:@163.;, :0 10-6693 1809, -:@. [ ]　　 ().　-293 .3/. 3/-, 29 3 .-1-- 1β.　 3/-293., -11-β (-1β).　 3/-.-1 -1β - . []　;;-1β; 　　凋亡相关斑点样蛋白 (-- 究 在细胞凋亡及炎症反应中的作用, 我们构建了带有 , )是 1999 年由日本衰老研究中 标签 的真核表达质粒。初步实验表明该质粒能在 [1] 29 3细胞中表达, 并具有抑制-1β分泌的生物活性。 心的 等 在研究细胞凋亡的过程中发现的一种新 蛋白, 该蛋白在细胞凋亡时会发生形态变化, 在细胞质中聚 1　材料和方法 集成中空的斑块。 目前已经发现 是炎症小体中一个重 [2, 3] 要的成员, 参与半胱天冬酶-1(-1)的活化过程 , 并 1.1　材料 由此影响白介素 1-β (-1β)的产生和活化。为了进一步研 提取试剂, 真核表达载体 3为- 公司产品。 3/为本室构建保存。 感受态大肠 [作者简介]　袁　媛, 女, 硕士研究生, 主要从事细胞生物学研究 杆菌10 为本室保存。 限制性内切酶 Ⅰ、 Ⅰ, [作者单位]　1.安徽大学生命科学学院, 合肥　230039;2.军事 酶购 自公司, 4 快速连接酶购自 学科学院生物工程研究所, 北京　100850;#安徽大学生命科学学院 公司, 质粒提取试剂盒为 公司产品, 引物合 和军事 学科学院生物工程研究所共同为第一单位 [通讯作者]　黄　蓓, -:@163.;钟　辉, :0 10- 成和质粒测序由奥科公司完成。 转染用脂质体购自- 6693 1809, -:@. 公司, 逆转录酶 -, 胶回收试剂盒购自公 　军事 学科学院院刊　20 10年 8月 第 34卷 第 4期　, 34, 4, , 20 10　 329 司。 培养基为公司产品, 胎牛血清为杭州四季 至 膜上, 用鼠抗 的抗体检测 -的表达。对 青生