地黄属植物DNA条形码鉴定及地黄栽培起源研究.PDF

• 648 • 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷 第 4 期 2016 年 2 月 地黄属植物 DNA 条形码鉴定及地黄栽培起源研究 夏 至，王璐静，黄 勇， 李贺敏，张红瑞，高致明* 河南农业大学农学院，河南 郑州 450002 摘 要：目的 评价 DNA 条形码通用序列对地黄属植物 Rehmannia Libosch. ex Fisch. et Mey. 的鉴定作用，探讨中药地黄 R . glutinosa 的栽培起源。方法 对地黄属物种的 ITS、psbA-trnH 、rbcL 和 matK 序列扩增和测序，比较各序列在种内和种间 变异。采用最近距离法、相似性有哪些信誉好的足球投注网站法、构建 Neighbor-Joining （NJ ）系统聚类树等方法进行鉴定分析。结果 对比地黄属 各种的 rbcL 和 matK 序列，结果显示 rbcL 序列完全一致，matK 序列同源性为 99.9%～100%。ITS 和 psbA-trnH 序列的平均 种间变异均大于平均种内变异，且 2 条序列的种间最小变异均大于种内最大变异。在 ITS 系统树上，地黄的所有样品与茄叶 地黄聚在一支，支持率为 96% ；psbA-trnH 和联合树上，地黄的所有样品聚为一单系分支（支持率为 55%和 58% ）。地黄与 茄叶地黄聚在的这一分支分别与裂叶地黄和高地黄聚在一支（在 ITS 和联合树上支持率为 55%和 68% ），与裂叶地黄和天目 地黄聚在一支（在 psbA-trnH 树上支持率为 80% ）。ITS 和联合树支持栽培地黄的 3 个品种与来源于河南温县、郑州、南阳 和北京野生地黄居群聚在一支，支持率为 51%和 69% 。结论 叶绿体基因 rbcL 和 matK 不适合作为条形码对地黄属进行鉴 定，ITS 和 psbA-trnH 序列可以作为中药材地黄与同属近缘种进行鉴定的条形码序列。裂叶地黄和天目地黄可能是四倍体地 黄的 2 个亲本来源，栽培的地黄品种可能起源于河南温县区域的野生群体。 关键词：ITS ；psbA-trnH ；地黄；DNA 条形码；鉴定；起源 中图分类号：R282.12 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2016)04 - 0648 - 07 DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2016.04.020 Identification of DNA barcoding in plants of Rehmannia Libosch. ex Fisch. et Mey. and origin of cultivated Rehmannia glutinosa XIA Zhi, WANG Lu-jing, HUANG Yong, LI He-min, ZHANG Hong-rui, GAO Zhi-ming Agronomy College, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002, China Abstract: Objective To evaluate the suitable candidate DNA barcoding of plants in Rehmannia Libosch. ex Fisch. et Mey., and unravel the origin of cultivated R . glutinosa . Methods Nuclear DNA ITS and chloroplast gene psbA-trnH, rbcL, and matK sequences of species in Rehmannia Libosch. ex Fisch. et Mey. were amplified and sequenced. The Kimura 2-Parameter (K2P) distances were calculated. Identification analyses were performed using Nearest Distance, BLAST1, and Neighbor-Joining (NJ) methods. Results A comparison on the sequ