大鼠骨髓间充质干细胞的分离与培养方法优化.PDF

J South Med Univ, 2014, 34(11): 1621-1626 doi 10.3969/j.issn. 1673-4254.2014.11.13 ·1621 · 基础研究 大鼠骨髓间充质干细胞的大鼠骨髓间充质干细胞的分离与培养方法优化分离与培养方法优化 1，2 1，2 1 1 1 3 3 1，2 1 祝旭龙 ，颜 谭 ，姚维杰 ，王永恒 ，程 冲 ，向俊西 ，吕 毅 ，高庆东 ，李建辉 1 2 陕西省人民医院// 西安交通大学第三附属医院肿瘤外科，陕西 西安 710068 ；延安大学医学院，陕西 延安 3 716000 ； 西安交通大学第一附属医院肝胆外科，陕西 西安 710061 摘要：目的建立一个分离、培养、纯化大鼠的骨髓间充质干细胞的方法。方法 使用贴壁法分离大鼠的骨髓间充质干细胞，通过 培养初期的频繁换液和传代过程中减少胰蛋白酶的暴露时间，达到骨髓间充质干细胞的纯化。流式细胞仪检测细胞表面标志 物，MTT 法检测细胞生长状况，暴露于不同的诱导培养基使细胞成骨、成脂，并向肝胆系分化。结果 分离所得的细胞阳性表达 CD29、CD44、CD90 ，而对于造血细胞标志物CD45 呈阴性。在成骨、成脂培养基的诱导下，细胞ALP、茜素红、油红O 染色均呈 阳性，并发现传至10代的细胞仍保持分化功能。将骨髓间充质干细胞贯续暴露于不同的细胞因子和激素，得到了表达肝细胞、 胆管上皮细胞特异标志的子代细胞。结论 通过改良后的方法可以高效、简洁地分离出形态均一的大鼠骨髓间充质干细胞，并 能够向多胚层的细胞分化。 关键词：骨髓；间充质干细胞；分离与培养；肝细胞；胆管上皮细胞；大鼠 Optimization of the method for isolating and culturing rat mesenchymal stem cells 1, 2 1, 2 1 1 1 3 3 1, 2 1 ZHU Xulong , YAN Tan , YAO Weijie , WANG Yongheng , CHENG Chong , XIANG Junxi , LÜYi , GAO Qingdong , LI Jianhui 1Department of Surgical Oncology, Shaanxi Provincial Peoples Hospital/Third Affiliated Hospital of Xian Jiaotong University, Xian 710068, China; 2 School of Medicine, Yanan University, Yanan 716000, China; 3Department of Hepatobiliary Surgery, First Affiliated Hospital of Xian Jiaotong University, Xian 710061, China Abstract: Objective To optimize the protocols for isolation and culture of mesenchymal stem cells from rat bone marrow (BMSCs). Methods BMSCs were isolated by adherence to plastic with frequent medium change and reduced trypsinization time. The cell growth curves were drawn and the surface markers of BMSCs were detected b