独一味基因表达sybrgreeni荧光定量pcr检测方法-广东农业科学.pdf

广东农业科学 2014 年第 12 期 133 独一味基因表达SYBR Green I 荧光定量 PCR 检测方法的建立 杨晓丽 罗 花 陈 志 乔 枫 青海师范大学生命与地理科学学院/青藏高原资源与环境教育部重点实验室袁青海 宁 810008 冤 要 为了建立一种检测独一味 mRNA 表达水平的 SYB R Green I 荧光定量 Real-Time PCR 方法遥 根据独一 味查尔酮合成酶 LrCHS冤和苯丙氨酸解氨酶 LrPA L 冤基因序列设计特异性引物袁运用 Real-T ime RT -PCR 方法建立 独一味基因的荧光定量标准曲线袁进一步研究独一味CHS 和 PA L 基因在不同组织中的表达遥 结果显示袁扩增曲线在 5 11 1伊10 耀1伊10 copies/滋L 范围内有很好的线性关系袁扩增相关系数在 0.995 以上遥 熔解曲线分析表明袁产物为特异单 峰袁无引物二聚体袁具有较高的特异性和灵敏度遥 独一味CHS 基因在不同组织中表达量顺序为花叶叶柄根茎袁 PA L 基因表达量顺序为叶柄叶花根茎遥 建立的检测方法能够成功用于独一味CHS 和 PAL 基因表达的检测袁为 研究独一味在 mRNA 水平的定量分析提供技术平台遥 关键词 独一味曰 SYB R Green I 曰 荧光定量 RT-PCR 曰 CHS 曰 PA L 中图分类号 S579.82 曰Q943.2 文献标识码 A 文章编号 1004-874X 2014冤12-0133-05 Establishment of a real-time PCR assay based on SYBR green I for detection of the gene expression of Lamiophlomis rotate (Benth.) YANG Xiao-li, LUO Gui-hua, CHEN Zhi, QIAO Feng (College of L ife and G eograp hical Sc ie nce ,Qinghai Normal Univ e rs ity/Educational Minis try Lab of Env ironme nt and Resourc e in Qinghai-Tibe t Platean, X ining 810008, China) Abstract 院T his study developed a real-time reverse-transcription poly merase chain reaction (RT -PCR) method based on SYB R Green I fluorescent for detection of Lamiophlomis rotate (Benth.) gene mRNA. According to the gene sequence in the conservative regions of chalcone sy nthase (LrCHS) and phenylalanine ammonia -lyase (LrPA L) in L. rotate , the specific primers were designed w ith LrCHS and LrPA L to construct