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细胞生物学杂志 Chinese Joumal of Cell Biology 2005 , 27: 679-683 一种有效纯化低拷贝质粒DNA 的改良硅藻土法 志 余宏傲张岚岚徐昌杰* 杂 (浙江大学国主系，农业部园艺植物生长发育与生物技术重点开放实验案，杭州 310029) 学 摘要 碱法制备的低拷贝质粒因含有大量杂质而无法获得有效的测序结果。为此，以纯 物 λDNA 为样品，对硅藻土纯化DNA 的方法进行了优化，表明硅藻土悬液的最佳用量是20μ1/μg 生 λDNA，回收率达77.31 %。应用此改良硅藻土法纯化一长为 14953 bp 的低拷贝质粒pLZI4，所 得质粒纯度达23.879岛，比未纯化前提高了 11.06 倍。经纯化的pLZ14 质粒测序信号强、无误认碱 胞 志 基，而未经纯化的质粒测序时信号弱、错误普遍存在。 杂 关键词 硅藻土;盐酸肌;质粒; DNA 纯化 细 学 DNA 的吸附介质，但也有研究口，4， 14， 16， 171 发现硅藻土 植物表达载体的构建是植物转基因研究的必要 物 也同样有效。同时，用肌盐(盐酸腻[19， 221 或异硫氨酸 环节，在应用于转基因研究之前，植物表达载体的 1 腻[3-6，16， 22 )取代NaI 也比较普遍，可避免NaI 试剂久 正确性需要得到鉴定。鉴定表达载体正确与否的常 生 用方法有PCR、酶切和测序。 PCR 鉴定最简便， 贮变色及pH 升高导致的低回收率问题。然而，先前 胞 的方法均没有就硅藻土等吸附介质的用量、回收率 但载体上重复序列(如pBI1 21 有两处NOS 终止子序 以及纯化效果等进行定量描述，因而也就在一定程 列)的存在有时对鉴定带来麻烦，另外偶而发生的 细 度上导致了纯化效果和回收率的低重复性，影响了 不是在预期的酶切位点的连接不能被有