15甾体激素类药物的分析.ppt

六、 色谱法 主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别 方法：薄层色谱法-对照品法 要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对照品溶液的主斑点相同。 HPLC法 主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏） 方法：对照品法 要求在含量测定项下记录的色谱图中，供试品峰的tR与对照品峰的tR一致。 第三节 特殊杂质检查 一、有关物质的检查 来源 ：原料、中间体、异构体、降解产物 特点：（1）可能存在多个甾体杂质 （2）结构类似 方法（具有一定分离能力）：TLC法（高低浓度对比法）；HPLC法（主成分自身对照） HPLC法（主成分自身对照） 判定方法： 规定杂质峰数目 规定杂质峰面积 特点： （1）不需对照品； （2）可以控制杂质的总量； 来源： 合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢 原理及方法： 二、硒的检查 醋酸氟轻松检查硒 取本品50mg，照氧瓶燃烧法进行破坏后，将吸收液转移至100ml容量瓶中，用水15ml冲洗燃烧瓶及铂丝，并入吸收液中，用水加至刻度。取硒对照液（0.05ug/ml）和上述供试品溶液分别用氨试液调节pH值至2.0 0.2后，转移至分液漏斗中，用水少量分次洗涤烧杯，洗液并入分液漏斗中，使成60ml，各加盐酸羟胺溶液（1→2）1ml，摇匀后，立即精密加二氨基萘试液5ml，摇匀，在室温下放置100分钟，精密加环己烷5ml，强烈振摇2′，静置分层，取环己烷脱水后，测A378nm。 规定 A供＜A对。 三、有机溶剂残留量的检查 （甲醇和丙酮） 甲醇 ≤0.3% 丙酮 ≤0.5% GC法 内标法定量 原理及方法： 供试液对照液 钼酸铵 磷钼酸铵 H+ 还原 磷钼酸蓝（钼蓝） 740nm A样 A对 四、游离磷酸盐的检查 检查 游离磷酸 地塞米松磷酸钠 精密称取本品20mg，置25ml量瓶中，加水15ml溶解，精密加钼酸铵硫酸试液2.5ml与1-氨基-2-萘酚-4-磺酸溶液1ml，加水至刻度，摇匀，在20℃放置30～50分钟，照分光光度法，在740nm处测定吸收度，与对照液4.0ml同法处理的吸收度比较，不得更大。 一、HPLC法 特点 用样量少，灵敏度高，分离效果好, 测定速度快. 甾体激素类药物常含有结构相似的其他甾体杂质。各国药典多采用RP－HPLC 第四节 含量测定 二、UV法 △４-3-酮 240nm 肾上腺皮质激素 雄性激素和蛋白同化激素 孕激素 苯环 280nm左右 雌激素 肾上腺皮质激素类 C17 -α－醇酮基--还原性 1. 原理 OH - [还原] (一)四氮唑比色法 有色甲臜 四氮唑盐 醇酮基 ? ? ? ? ? ? ? - a - 17 C 三、比色法 三苯甲臜↓深红 氯化三苯四氮唑 （TTC） 红四氮唑（RT） 蓝四氮唑（BT） 双甲臜（暗蓝） 2. 方法 对照品法 40～45′ 暗 3. 讨论 （1） 基团对反应速度的影响 C11= O＞ C11－OH C21－OH＞ C21-酯 21位酯化后反应速度减慢，酯化基团越大反应速度越慢 （2） 溶剂、水分的影响 含水量＞5%→ν↓ 含水10%→A↓10% 含水30%→几无反应 — 无醛无水乙醇 醛 → A↑ — 无水乙醇 （3）碱的种类及加入顺序 反应应在强碱性（pH13.75）条件下进行 以氢氧化四甲基铵的结果最佳 加入顺序： （4） O2与光线的影响 反应过程 反应产物 怕光 →避光、快速 O2影响颜色强度和稳定性 →隔绝空气、 快速、充N2 （5） 温度与时间 t℃↑→ν↑→甲臜分解↑→%↓ ChP 25℃ 40～45′ BP 30℃ 1h 肾上腺皮质激素、 雄性激素和蛋白同 化激素、孕激素 C3－酮基 1. 原理 HCl （缩合） (二)、异烟肼比色法 异烟腙（黄色） 2. 方法： 暗45′ 对照品法 A供 A对 ＝ C供 C对 C供 ＝ A供 A对 ×C对 （1）溶剂的选择 异烟肼盐酸盐→甲醇、乙醇 无水甲醇 无水乙醇 3.讨论 酸、异烟肼的量 (2) 盐酸 : 异烟肼 = 2 : 1 （3）水分、温度、O2与光线的影响 含水量↑→腙水解↑→A↓→%↓ 不挥发溶剂、不吸收水分时→ O2与光线无影响 温度 t℃ ↑ → ν↑ 反应速度 （4） C3= O ＞ C17= O 、 C20= O