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俞萍_试验二_遗传病基因突变分析
* * 医学遗传学实验 遗传病基因突变分析(SSCP) 实验内容 7.5?l PCR产物 冰水浴中骤冷10分钟 混匀后,100?C沸水中加热变性10分钟 加样 电泳(140V,~2hr) 银染,约50分钟 7.5 ?l loading buffer (95%甲酰胺) 1.5ml离心管 遗传病基因突变分析 2、聚合酶链反应加样(DMD) (P30) 双蒸水 17.8 ?l 10xBuffer 2.5 ?l MgCl2 2 ?l dNTPs 0.5 ?l Primer R+F (混合) 1.4 ?l DNA 模板 0.5 ?l Taq-DNA聚合酶 0.3 ?l 石蜡油 1滴 实验原理: 1)DNA抽提 2)聚合酶链反应 3)单链构象多态性分析 遗传病基因突变分析 1)DNA抽提 核基因组DNA可以从任何有核细胞中提出 Agarose gel electrophoresis 双蒸水 10*Buffer MgCl2 dNTPs(ATP/CTP/GTP/TTP) Primer(引物 )R + F DNA 模板 Taq-DNA聚合酶 石蜡油 PCR 组分 2)聚合酶链反应 聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)是一种体外由引物介导的特定DNA序列的扩增方法. 变性:95℃,1min 退火:温度和引物有关 延伸 : 时间和待扩 增产 物长度有关 72 ℃ for Taq Step 1 (1个循环) 94?C 5分钟 Step 2 (30个循环) 94?C 30秒 59?C 30秒 72?C 30秒 Step 3 (1个循环) 72?C 5分钟 3)单链构象多态性分析
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