双黄升白颗粒对化疗所致骨髓抑制Lewis肺癌荷瘤鼠-上海中医药杂志.PDF

上海中医药大学学报　第２９卷　第６期　２０１５年１１月 ·４５· 双黄升白颗粒对化疗所致骨髓抑制Ｌｅｗｉｓ 肺癌荷瘤鼠Ｎｏｔｃｈ信号通路的双重调控作用 王立芳　徐振晔　司海龙　王中奇　邓海滨　苏　婉　金贵玉 上海中医药大学附属龙华医院肿瘤科　（上海　２０００３２） 【摘　要】　目的：探讨双黄升白颗粒对荷瘤鼠化疗骨髓抑制期 Ｎｏｔｃｈ信号通路的调控作用。方法：采用 Ｌｅｗｉｓ肺癌荷瘤鼠腹腔注射环磷酰胺３００ｍｇ／ｋｇ制成化疗骨髓抑制模型。荷瘤鼠随机分为空白组、模型组、 治疗组，另设模拟接种的正常组，每组８只。治疗组在造模同时灌服双黄升白颗粒溶液０．４ｍｌ／ｄ，连续６ｄ； 其他组均灌服生理盐水０．４ｍｌ／ｄ，连续６ｄ。常规计数白细胞、红细胞、血小板数和骨髓有核细胞数，称取 瘤重，荧光定量ＰＣＲ法检测Ｎｏｔｃｈ信号通路中Ｎｏｔｃｈ１、Ｎｏｔｃｈ２、Ｎｏｔｃｈ３、Ｊａｇｇｅｄ、ＣＳＬ的ｍＲＮＡ表达。结果：治 疗组白细胞数、骨髓有核细胞数均高于模型组（Ｐ＜０．０５），Ｎｏｔｃｈ１、Ｎｏｔｃｈ２、Ｎｏｔｃｈ３、ＣＳＬ在骨髓中的ｍＲＮＡ 表达高于模型组（Ｐ＜０．０５），在肿瘤中的表达则低于模型组（Ｐ＜０．０５）；各组红细胞、血小板、瘤重、Ｊａｇｇｅｄ ｍＲＮＡ表达未发现明显差异（Ｐ＞０．０５）。结论：双黄升白颗粒治疗骨髓抑制的作用机制可能与调控 Ｎｏｔｃｈ 信号通路有关，且该调控作用具有双重特性，即在上调骨髓 Ｎｏｔｃｈ信号通路主要基因表达的同时抑制肿瘤 中部分基因表达。 【关键词】　双黄升白颗粒；Ｎｏｔｃｈ信号通路；骨髓抑制；化疗；Ｌｅｗｉｓ肺癌；荷瘤鼠 【中图分类号】　Ｒ２８５　　【文献标志码】Ａ　　【ＤＯＩ】１０．１６３０６／ｊ．１００８８６１ｘ．２０１５．０６．０１３ 　　骨髓抑制是肿瘤化疗常见毒副反应，主要表现 ＳＰＦ级饲养室。Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞株，购自中国科学院 为外周血细胞（尤其是白细胞）降低，常因此导致化 上海生命科学研究院细胞资源中心。 疗药物不能及时、足量应用，进而影响化疗疗效。 １．１．２　药物和试剂　双黄升白颗粒：由生黄芪、黄 双黄升白颗粒来源于上海市名中医徐振晔教授的 精、天花粉、骨碎补、女贞子、仙灵脾６味药组成，上 临床经验方药，作为院内制剂已应用近２０年，前期 海中医药大学附属龙华医院中药房提供（沪卫药 ［１２］ 临床研究显示该药临床疗效良好 ，基础研究显 剂：Ｓ９６１０１），蒸馏水溶解至含生药２ｇ／ｍｌ。环磷酰 ［３５］ 示该药对细胞生长具有双重调控作用 。本研究 胺（ＣＴＸ），江苏恒瑞医药股份有限公司生产（批号： 旨在前期研究基础上，从 Ｎｏｔｃｈ信号通路调控角度 。ｃＤＮＡ合成试剂盒、荧光定量 ＰＣＲ试 对其双重调控作用进行进一步分析探讨。 剂盒，由Ｂｉｏｌｉｎｅ公司生产。引物序列查询及引物探 针合成，由上海捷瑞生物工程公司完成。 １　材料与方法 １．１．３　仪器　ＸＷ８０Ａ型旋涡振荡器（Ｖｏｒｔｅｘ），上 １．１　实验材料　 海青浦泸西仪器厂生产；干式恒温器（Ｋ１０ＣＤ），杭 １．１．１　动物和细胞株 　３２只ＳＰＦ级近交系雄性 州蓝焰科技有限公司生产；低温冷冻离心机（１ Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠，平均体质量（１９．６２±０．６８）ｇ，购自 １５ｋ３Ｋ１５）、生物安全柜（ＴＹＰＥＢ２），Ｓｉｇｍａ公司生 上海斯莱克实验动物有限公司，动物合格证号： 产；ＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ检测仪（ＡＢＩ７５００），美国ＡＢＩ公 ２０１２０００２。饲养于上海中医药大学附属龙华医院 司生产；倒