培养基模拟生产验证方案.doc

培养基模拟生产验证 1概述： 对无菌灌装过程进行胰酪胨大豆肉汤培养基模拟灌装试验，通过对其污染率的测试，来确认预充式无菌灌装过程和各种规程防止微生物污染的水平能达到可接受的合格标准。 2目的与范围： 2.1无菌生产环境、人员消毒卫生状况与产品无菌保证的验证。 2.2用棉球擦拭的方法验证设备设施清洁消毒效果。 2.3验证的试验过程中监测底塞、卡式瓶的无菌性，使之始终符合卡式瓶生产工艺要求。 2.4验证除菌过滤的可靠性，保证生产出合格的中间体半成品。 2.5验证物料转移过程中物料的无菌性，使之满足卡式瓶生产工艺需要。 2.6模拟无菌灌装试验来考察灌装操作过程微生物的污染率不大于0.1%，进而证明灌装工艺条件符合无菌灌装的工艺要求。 2.7通过轧盖密封后瓶内抽真空进行气密性测试，证明与轧盖相关的工艺条件符合卡式瓶生产工艺要求。 3职责： 3.1相关生产人员必须依照本规程进行生产操作。 3.2生产部门负责人及QA负责指导与监查本文件的执行。 3.3文件的修定和定期审核应由生产部门负责人员和QA负责。 3.4所有参与本验证过程的生产人员都必须依照本方案进行生产操作。 3.5验证过程应严格按照规定的内容进行，若因特殊原因确实需要变更时，应填写验证方案变更申请及批准书（附表1），报验证委员会批准。4.1 Validation of aseptic filling for solution drug product 4.2药品生产验证指南（2003版） 5设备及仪器： 序号 设备或仪器名称 使用数量 用途 1 64kg磅秤 1 秤量体积 2 6kg、3 kg天平 1 秤量培养基 3 卡式瓶分装机、西林瓶分装机 1 分装培养基 4 蒸汽灭菌柜 1 灭菌 5 卡式瓶洗瓶机、西林瓶洗瓶机 1 洗瓶 6 卡式瓶和西林瓶隧道灭菌机 1 消毒 7 胶塞清洗机 1 烘干、消毒 8 50L搅拌桶 2 盛装培养基 9 搅拌棒 1 搅拌 10 配制罐1 1 配制 11 配制罐2 1 配制 12 套筒过滤器 1 过滤 13 蠕动泵 1 泵液体 14 20L不锈钢桶 2 容器 15 30L不锈钢桶 3 容器 16 2L烧杯 2 容器 17 10L不锈钢桶 2 容器 6物料 序号 物料名称 1 注射用水 2 蒸馏水 3 管制瓶、卡式瓶 4 胶塞 5 铝盖 6 胰酪胨大豆肉汤 7 75%乙醇 7验证内容 7.1判断标准 产品无菌性的可信限：95% 产品允许污染的概率：警戒限为＜0.05%，可信限为＞0.1% 7.2培养基配制、灭菌和过滤： 7.2.1 按30g胰酪胨大豆培养基溶于1L蒸馏水的比例配制适量的培养基溶液，搅拌并加热溶解或直接量取70℃以上的蒸馏水，搅拌溶解后，，将盛放培养基的桶在蒸汽灭菌柜内121℃灭菌15分钟，待灭菌后自然冷却 7.2.2 配制用于验证分装生产线的无菌性的培养基溶液体积应满足灌装3000支以上的量（一般灌装5000支左右）。 7.2.3冷却后用已灭菌的0.22um的套筒过滤器过滤于已灭菌的相应容量的不锈钢桶中。注：过滤过程应遵守无菌操作。 7.3培养基无菌性试验： 将用于模拟灌装的胰酪大豆培养基另外用ml试管配制（0ml/管）在℃灭菌分钟，盖塞、封口后在℃培养7天在℃培养7天。培养基微生物生长性能试验： 将配制好的灭菌培养基分装于10支试管中（0ml/管），在其中４支管内接种＜１００ＣＦＵ的枯草杆菌枯草杆菌℃下培养7天，在另４支试管内接种＜１００ＣＦＵ白色念珠菌，不接种白色念珠菌的ＴＳＢ空白在℃培养７天，培养过程中每天观察微生物生长情况，，空白试验无菌生长。无菌灌装所用的瓶和塞经灭菌处理后，进行模拟灌装模拟灌装生产的全部样品在℃培养７天，℃下培养7天，一半倒置，一半正立培养。灌装过程中随机抽取2瓶不进行设备灌装直接手动加底塞、灌装培养基、封口，作为阴性对照。随意地取出灌有培养基的瓶，向挑选出来的瓶逐个注入0.1ml的枯草杆菌混悬液每0.1ml中CFU少于100个℃下培养7天，向挑选出来的另瓶注入白色念珠菌混悬液每0.1ml中CFU少于100个在℃培养７天。7天内，50%以上接种卡式瓶的培养基里都出现繁殖现象，则判为合格。对瓶内的繁殖情况要进行目检，对污染的卡式瓶要点清数量（如有污染菌的话）。污染了的卡式瓶必须仔细检查是否有瓶、塞、盖的损坏情况。 7.5.4试验结果评价 评价无菌模拟灌装试验结果的主要指标之一是微生物污染率，其计算方法如下： 污染率水平=[微生物生长的瓶数/（总分装瓶数-破损瓶数）]×100% 如果在14天的培养期内，其污染率大于0.1%，则应立即停止生产，调查污染产生的原因应检查铝盖、底塞的密封情况，若有破损应记录并检查其破损原因。原因找到后立即重复进行无菌