HPLC柱切换技术在临床药物分析中的应用.docx

综述与评论(5～9)HPLC柱切换技术在临床药物分析中的应用虹,蒋生祥,李永民,陈立仁3张文珠,张(中国科学院兰州化学物理研究所,甘肃兰州730000)摘要:综述了近十年来高效液相色谱柱切换技术在药物分析中的应用情况,主要介绍了柱切换技术在生物样品纯化、富集和手性分离方面的实际应用,该技术可用于直接进样分析,特别适用于临床药物分析,可用于药代动力学、生物利用度等研究.关键词:多维高效液相色谱;柱切换技术;药物分析文章编号:100623757(2002)0120005205中图分类号:O657.7文献标识码:A柱切换技术采用切换阀连接两根或两根以上相同或不同分离机理的色谱柱,通过改变流动相走向,在前一根色谱柱完成被测组份与干扰杂质的分离,达到纯化与富集的目的,在随后的色谱柱完成被测组份的测定.因此,该技术可实现对复杂样品的直接进样分析.目前已成为分析复杂化合物的有力工具,被应用在环保分析、农药分析、生化分析、制剂分析等许多领域,其中在体内药物分析中应用最为广泛.由于生物样品中所含物质成分复杂,药物含量极低(大多在μg/L～mg/L之间),直接进样分析困难.采用柱切换技术可以实现生物样品(血液、尿液、脑脊液等)直接进样分析,过程简单,结果准确,延长了色谱柱寿命.近年来,在药代动力学、生物利用度及血药浓度监测方面的文献逐年增多.由于该技术需要在原有液相色谱基础上添加色谱柱、切换阀等设备,受条件限制,国内相关文献报道不多,且极少联用不同分离模式色谱柱(多维高效液相色谱)和利用柱切换技术分析生物样品中的手性药物.本文综述了近十年来柱切换技术用于生物药物分析的相关文献,主要综述了柱切换技术在样品纯化、富集和手性药物分析中的应用,旨在促进国内柱切换技术的发展.走向和流动相系统而完成复杂样品直接进样分析的技术.随后从分离机理的角度又引入多维高效液相色谱(MDHPLC)概念.按照Giddings3提出MDHPLC的两条标准:(a)样品组份必须经过两种或两种以上的不同分离模式;(b)各组份间的分离不受后续分离的影响.在技术上两者有许多相似之处,但是MDHPLC强调样品必须经过不同的保留机理.根据样品的传递过程不同又可分为4:(a)直接传递技术即样品随流动相依次直接通过不同的色谱柱;(b)间接传递技术即样品随流动相通过第一根色谱柱后,并不直接进入后面的色谱柱,而是通过切换阀使洗脱能力更强的流动相把杂质洗脱下来.之后样品再进入后面的色谱柱分离;(c)反向传递技术即类似于间接传递技术,只是两次流动相的流动方向相反;(d)进样环传递技术即在不同色谱柱之间加入进样环,可以避免柱间过高的压力.2在临床非手性药物分析中的应用2.1样品的纯化与富集对富含蛋白质的体液,如血浆、血清等进行生物药物分析之前,往往需要复杂的预处理过程.传统的预处理过程主要为液2液萃取,但是这种方法存在过程复杂、花费时间长、耗费溶剂量大及精确性差等缺点.利用柱切换技术进行生物样品纯化,首先在柱1实现体液中干扰大分子与待测药物的分离,排除内源性物质的干扰,然后将药物从柱1转移至柱2柱切换技术的类型70年代开始使用柱切换(column2switching)技1术1,2,是指多柱联用.通过切换连接阀改变流动相作者简介:张文珠,女,28,博士生,主要从事高效液相色谱研究.3通讯联系人.收稿日期:2001209230;收到修改稿日期:2001211219.6分析测试技术与仪器第8卷完成色谱分离,一般仅需样品离心、过滤、进样、切换阀等四个步骤,简化了以往的复杂操作.样品除需要纯化之外,由于在生物体液中含量极低,痕量样品的富集也十分重要.柱切换技术对样品的富集,是利用预柱将所测痕量物质保留压缩在柱顶端的狭窄区域内,然后改变洗脱液强度使待测组分进入分析柱分离.通过优化流动相、选择适当的预柱填料,避免色谱带扩展,达到富集的目的.Roth等5首先采用柱切换技术进行了样品富集研究,用反相、离子交换色谱柱联用分析了血浆、尿样和唾液中的抗血凝素和强心素.Boos等6报导了使用该技术检测了尿样中的12芘醇,通过使用酞菁修饰的多孔玻璃作预柱的填料,使12芘醇富集从0.71pmol/250μL到28.25pmol/250μL.Aerts等7研究了在线渗析与HPLC偶联进行样品富集.该技术利用样品渗析原理,透过纤维素膜,排除大的蛋白质或脂类分子,然后通过预柱,对痕量被测物进行富集,再切换进入分析柱分离.Chen等8利用微渗析技术,分析了咖啡因、邻乙酰氨基苯酚及其代谢物.李永民等9利用胶束色谱和反相色谱联用分析了六亚甲基二乙酰胺.2.2预柱的选择进行生物药物分析时,为了使内源性杂质尽快流出,预柱在尺寸上通常短于分析柱,既可以缩短分析时间,又节省了填料.一般预柱内径2～4mm,长3～5cm10.预柱的填料粒径一般大于分析柱,