植物油中角鲨烯的提取与高效液相色谱法分析.docx

植物油中角鲨烯的提取与高效液相色谱法分析欣1于瑞祥1杨瑞钰2方晓明3丁卓平1张(上海海洋大学食品学院1，上海(上海市标准化研究院2，上海(上海出入境检验检疫局3，上海201306)200031)200135)摘要建立了硅胶柱提取，高效液相色谱法分析植物油中角鲨烯的方法。样品用石油醚溶解，过硅胶柱净化，经C18柱分离，紫外检测(210nm)。结果表明，角鲨烯与其他杂质峰得到良好分离，在2～1000mg/L浓度范围内，峰面积与浓度呈良好线性，线性相关系数(Ｒ2)0．998。在大豆油中添加5．0、100、500和1000mg/kg水平的角鲨烯，平均加标回收率为82．4%～89．3%，相对标准偏差小于7．1%(n=8)，方法测定低限(LOQ)5mg/kg。本方法准确、灵敏、可靠，已应用于实际样品分析。关键词植物油角鲨烯提取高效液相色谱法中图分类号:TS207．3文献标识码:A文章编号:1003－0174(2013)05－0096－04角鲨烯常温下为无色油状液体，是一种高度不饱和脂肪族烃类化合物。其最初是从鲨鱼的肝油中发现的，1914年被命名为Squalene，其化学名称为2，6，10，15，19，23－六甲基－2，6，10，14，18，22－二十四碳六烯，属开链三萜，又称鱼肝油萜，也称鲨烯［1］。角鲨烯不仅具有促进新陈代谢，活化细胞、强化内脏的作用，还具有强烈的抗氧化作用，能有效地防止细胞的老化和癌变、抗癌、防癌，提高机体的免疫力。目前，角鲨烯主要来自于深海鲨鱼肝油，同时也少量存在于油脂不皂化物中，尤其在橄榄油、棕榈油及其脱臭馏出物中含量较多，菜籽油、大豆油、米糠油、棉籽油等植物油也含有一定量角鲨烯［2］。目前，关于角鲨烯的检测分析以气相色谱法居多［3－5］，也有采用高效液相色谱法进行测定，如陈全斌等［6］在检测罗汉果种仁油中的角鲨烯时，将油用氯仿定容后直接进行高效液相色谱分析。Murkovic等［7］采用高效液相色谱法分析橄榄油中角鲨烯含量，样品除稀释之外未做任何前处理，这样不仅对色谱柱易造成损害，降低仪器灵敏度，而且样品中较多杂质的存在对目标物质的判断产生干扰。Nenadis等［8］用高效液相色谱法测定橄榄油中角鲨烯时，将样品用甲醇/乙腈(体积比为7∶3)的混合溶液提取，经24h冷冻后取上清液过滤，溶剂蒸发后所得的残余物用乙腈定容，虽其对样品进行了前处理，但是花费时间过长。本研究建立了硅胶柱提取、HPLC法测定植物油中角鲨烯的方法，该方法准确、灵敏、可靠，测定低限(LOQ)为5．0mg/kg，与Nenadis等［8］的定量检测限(79mg/kg)相比更低、更灵敏。本方法已应用于实际样品分析，对于植物性角鲨烯的开发及应用具有重要意义。11．1材料与方法试剂和仪器角鲨烯标准品:纯度≥98%，美国Sigma公司。石油醚:色谱纯，沸程35～60℃，加拿大Caledon公司;正己烷:色谱纯，美国J．T．Baker公司;乙腈:色谱纯，加拿大Caledon公司;叔丁基甲醚:色谱纯，美国Sigma公司;无水硫酸钠:分析纯，国药集团化学试剂有限公司，于500℃烘4h以上，冷却后储存于干燥器中备用;硅胶60:0．063～0．200mm，德国Merck公司，于450℃烘5h以上，冷却后加入2%水，混匀，转移至广口试剂瓶中，盖塞备用;水为超纯水。2695型高效液相色谱仪:美国Waters公司，配2487型紫外检测器;N－EVAP111型氮吹仪:美国Organomation公司;硅胶柱:国药集团化学试剂有限基金项目:国家质检总局科研项目(2012IK184)，上海市科委工程中心建设(11DZ2280300)，上海市技术性贸易措施应对专项(12TBT010)收稿日期:2012－10－08作者简介:张欣，女，1988年出生，硕士，食品安全分析通讯作者:方晓明，男，1961年出生，研究员，博士，食品安全分析丁卓平，女，1957年出生，教授，食品安全公司，为带活塞的砂芯玻璃层析柱(10mm×250mm)，加3．0g硅胶，顶端加0．5cm无水硫酸钠。97第28卷第5期张欣等植物油中角鲨烯的提取与高效液相色谱法分析试验方法可见，经硅胶柱提取/净化后，角鲨烯获得基线分离，没有杂质峰干扰，大大提高了检测灵敏度。1．21．2．1标准溶液的配制准确称取100mg角鲨烯标准品于100mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，摇匀，得到1．0mg/mL角鲨烯标准储备液。1．2．2样品处理称取植物油样品0．50g于小烧杯中(精确至0．001g)，加入5mL石油醚，混匀，倒入硅胶柱中，然后重复2次用5mL石油醚润洗烧杯，洗涤液一并倒入小柱中，当石油醚液面与上端无水硫酸钠层相切时，加入30mL石油醚，收集全部的45mL洗脱液至50mL收集管中，用氮吹仪氮吹至干，随后用正己烷定容至2．0mL(