超高效液相色谱法测定调味料中新红_酸性红_赤藓红的含量.docx

超高效液相色谱法测定调味料中新红、酸性红、赤藓红的含量王锋/上海市浦东新区计量质量检测所0引言合成色素因价格低廉、染色性能好、用量少等特点受到许多食品企业的青睐。合成色素是食品中添加的非营养成分，而合成色素主要是以苯、甲苯、萘等化工产品为原料，经有机反应化合而成的化合物。这类色素大多具有一定毒性，尤以偶氮化合物合成着色剂的致癌作用更明显，因此对食品中色素的含量进行检测具有重要意义。大量的研究报告指出，几乎所有的合成色素都不能向人体提供营养物质。某些不法商贩为使复合调味料颜色鲜艳诱人，会添加人工合成着色剂。但由于复合调味料具有高脂肪、高蛋白质等特性，给检验的前处理工作带来很大不便。目前国家标准中没有具体规定前处理方法，本文结合实际工作和有关文献报道，挑选偶氮化合物合成着色剂中新红、酸性红、赤藓红为代表，建立有效测定复合调味料中合成着色剂的前处理方法，操作简便，准确可靠。目前，国标法（GB/T5009.35-2003）使用高效液相色谱法检测色素只适用于饮料、糖果、酒类、蜜饯等食品，不能检测酸性红，而且赤藓红的前处理方法与其他的色素提取方法不一样，整个检测工作繁琐。行业标准（SN/T1743-2006）使用高效液相色谱法检测色素只适用于饮料、糖果，不能检测新红和赤藓红。但在实际工作中，经常遇到半固体食品（如调味酱）和复合调味料（由两种以上调味料添加或者不添加其他配料混合而成）需要检测红色素。由于这些食品含有蛋白质、淀粉类大分子以及油脂，直接进样会堵塞、损伤色谱柱。而采用有机溶剂提取，操作过程繁琐，对操作者健康的损害大，并且普通的高效液相色谱法测定需要梯度洗脱，检测时间长。为此，笔者对国标法进行改进，探讨出针对复合调味料样品的前处理方法。采用UPLC进行调味料样品中新红、酸新红、赤藓红的含量测定，获得了良好的效果。1试验原理食用色素就来源可分成两大类：天然色素和合成色素。新红、酸性红、赤藓红这三种合成色素在酸性和中性条件下比较稳定，能溶解于水和含水的溶剂中。聚酰胺是具有二极性的化合物，水溶性酸性染料在酸性条件下被聚酰胺粉吸附，而在碱性条件下被解吸，过滤后经流动相带进色谱柱后进行分离，以保留时间定性，以峰面积定量。2实验2.1仪器、试剂与材料2.1.1仪器：超高效液相色谱仪——AgilentUPLC1290配二极管阵列检测器、恒温箱、自动进样器以及Agilent化学工作站；ANKETDL-5-A型离心机，转速4000r/min；100目的砂心漏斗（或者G3垂融漏斗）；0.22μm微孔滤膜过滤器；氮吹仪（上海安谱科学仪器厂）；Milli-QIntegral纯水机。摘要对国标法进行改进，建立了用超高效液相色谱法（UPLC）测定调味料中的新红、酸性红、赤藓红的方法。该方法的检出限新红、酸性红、赤藓红分别为0.04mg/kg、0.03mg/kg、0.03mg/kg，样品加标测定结果的相对标准偏差均小于2%（n=6），三种不同水平平均加标回收率均在94.3%以上。结果表明，该方法可以快速、准确地对调味料中新红、酸性红、赤藓红含量进行检测。关键词UPLC；调味料；新红；酸性红；赤藓红2.1.2试剂：甲醇：色谱醇；0.02mol/L的乙酸铵溶液（经0.22μm微孔滤膜过滤）；聚酰胺粉（尼龙6）：过200目筛；氨水；pH=6的水（60℃）：水加柠檬酸溶液调PH值到6；无水乙醇-氨水-水（7+2+1）溶液。2.1.3标准物质：新红标准物质（含92.0%）、酸性红标准物质（含68.0%）、赤藓红标准物质（含88.0%），上述标准物质均由Dr.Ehrenstorfer公司提供。2.1.4标准溶液：称取三种标准物质，用纯水溶解并定容，使新红、酸性红、赤藓红的浓度分别为（2.25、3.12、2.50）、（4.50、6.25、5.00）、（9.00、12.50、l0％钨酸钠溶液，使蛋白质沉淀，过滤，用少量水洗涤，收集滤液。液状的样品过滤后取滤液。2.2.3色素的提取色素的提取方法有许多，如：羊毛染色法、聚酰胺粉法、离子交换法、分子筛分离法等，最常用的是聚酰胺粉法。将收集的过滤液用柠檬酸溶液调pH=6，并加热到60℃。加入1g调成粥状的聚酰胺粉，用玻璃棒搅拌均匀。以砂心漏斗抽滤，用60℃pH=4的水洗涤多次。用乙醇-氨水-水溶液解吸3-5次，直至解吸液无色，合并解吸液，加乙酸中和，用氮吹仪浓缩至近干，用水定溶至5mL。2.2.4标准曲线的制作和测定配制浓度分别为（2.25、3.12、2.50）、（4.50、6.25、5.00）、（9.00、12.50、10.00）、（18.00、25.00、20.00）和（45.00、62.50、50.00）μg/mL的新红、酸性红、赤藓红标准溶液系列。各进样10.0μL进行测定，记录保留时间及峰面积。各浓度均重复进样2次，以不同浓