RNA干扰抑制CD147表达对人胃癌细胞SGC7901增殖侵袭和顺铂.PPT

报告内容 研究背景 研究目标 实验方法与结果 实验结论 一、 研究背景 胃癌概况 胃癌最常见的恶性肿瘤之一，恶性肿瘤致死占第二位 。其恶性程度较高，转移扩散严重，多数患者就诊时已属中晚期，因而死亡率较高 。 MMP简介 肿瘤的侵袭和转移是一个复杂的过程，其中细胞外基质和基底膜的降解是肿瘤转移过程中的重要步骤。这与细胞外基质金属蛋白酶（extracellular matrix metalloproteinase，MMP）的参与密不可分。 MMP是一个锌离子依赖的蛋白酶家族，目前已发现26种。MMP的主要功能是降解细胞外基质。肿瘤细胞利用MMP的基质降解能力迁移到其他部位。在肿瘤与间质交界处，MMP往往高表达 。 20世纪80年代，Biswas实验室从人肺癌细胞株LX-1的细胞膜上分离得到了一种58 kDa的糖蛋白，具有刺激成纤维细胞合成MMP-1的功能，将其命名为肿瘤胶原酶刺激因子（tumor collagenase stimulating factor，TCSF）。 进一步研究表明TCSF不仅能刺激MMP-1的产生，还能刺激MMP-2、MMP-3、MMP-9和MMP-11等的产生，因此将其重命名为细胞外基质金属酶诱导因子（extracellular matrix metalloproteinase inducer，EMMPRIN)。 第六届人类白细胞分化抗原协作组会议将EMMPRIN命名为CD147。 CD147的结构 CD147属单次跨膜糖蛋白，胞外段中的4个半胱氨酸残基形成2个二硫键，构成2个典型的半球形Ig结构域。 细胞内的CD147存在低糖基化（ low glycosylated CD147， LG）和高糖基化（high glycosylated CD147，HG）形式，分子量分别是32~44kDa、45~65kDa。只有HG形式能刺激MMP的产生。 CD147的功能 CD147是一种广泛表达于细胞表面，在体内分布广泛，参与精子发生、胚胎发育、肿瘤的侵袭和转移、炎症反应、病毒感染等多种生理和病理过程，是一个多功能的分子。 免疫组化实验证实CD147在多种恶性肿瘤中高表达，包括膀胱癌、皮肤癌、肺癌、乳腺癌、淋巴癌和胰腺癌等。并且肿瘤的恶性程度越高，CD147的表达水平也越高。 CD147在肿瘤发生发展中的作用 1. 促进肿瘤的侵袭和转移 CD147就是通过刺激成纤维细胞及肿瘤细胞本身产生多种MMP来降解基底膜和细胞外基质，从而促进肿瘤的浸润和转移的。 2. 诱导肿瘤血管生成 血管内皮生长因子（vascular endothelial growth? factor ， VEGF）是很多情况下血管生成过程的主要调节因子，包括肿瘤形成过程 。CD147可以诱导VEGF的表达。 3. 促进肿瘤细胞多药耐药 在多种多药耐药的肿瘤细胞中都观察到CD147的高表达。CD147可激活PI3K/AKT细胞存活信号通路。在大多数恶性肿瘤细胞中此通路均被激活。 胃癌中CD147的表达 日本Toyama大学的Zheng HC等研究表明：在正常胃黏膜发展为增生性或化生性胃黏膜，最后发展为胃癌的过程中，CD147的表达量是逐渐增加的，并且CD147的表达与肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移以及MMP-2、MMP-9和VEGF的表达呈正相关。 胃癌组织中CD147的表达 二. 研究目标 本实验旨在运用RNA干扰技术抑制胃癌细胞株SGC7901中CD147基因的表达，研究该基因沉默后对肿瘤细胞生长、侵袭能力及化疗药物敏感性的影响，探讨CD147在胃癌中的作用。 三、研究方法及结果 CD147shRNA真核表达载体的构建与鉴定 ↓ 转染SGC7901细胞，筛选稳定表达干扰载体的SGC7901细胞株 ↓ MTT法检测SGC7901细胞增殖水平的变化 ↓ 明胶酶谱法检测SGC7901细胞MMP-2、MMP-9分泌的变化 ↓ SGC7901细胞体外侵袭力测定 ↓ MTT检测SGC7901细胞顺铂敏感性的变化 胃癌细胞株SGC7901源自一位56岁女性胃腺癌患者的淋巴结转移瘤。研究表明其侵袭能力强，恶性程度高。我们前期研究表明，该细胞表面CD147是高表达的。 shRNA（short hairpin RNA）表达载体的构建 pSilencer3.1-H1 neo shRNA