哇巴因结合肽氨基酸序列的测定3.PDF

( ) ·1576 · 中国病理生理杂志 　Chinese Journal of Pathophysiology 　2004 ,20 9 :1576 - 1579 ( ) [文章编号] 　1000 - 4718 2004 09 - 1576 - 04 哇巴因结合肽氨基酸序列的测定 1 2 张明娟 , 　吕卓人 ( 1西安交通大学第二医院心内科 , 陕西 西安 710004 ; 2 西安交通大学第一医院心内科 , 陕西 西安 710061) 　　[摘 　要] 　 目的:确定能与哇巴因特异性结合的多肽氨基酸及基因序列 ,为实现阻断或拮抗哇巴因与钠泵的作 用奠定实验基础 。方法 : 采用噬菌体随机肽库表面呈现技术筛选出哇巴因特异性结合肽 ,通过测序 ,获得氨基酸序 列 ,进行同源性分析 、合成筛选出的 12 肽 ,人工合成哇巴因结合肽 ,并检测其与哇巴因的结合能力 。结果 : 从噬菌体 ( ) ( ) ( ) ( ) 12 肽库中筛选出3 种多肽 。肽 A 12 肽 的筛选一致率达到 667 % 8/ 12 ;肽 B 8 肽 筛选一致率为 167 % 2/ 12 ; ( ) ( ) 肽 C 12 肽 为 83 % 1/ 12 ;仅 1 例未见插入的多肽片段 。GenBank 中蛋白质同源性分析结果 :肽 A 、B 、C 均未见同源 蛋白。获得特异性哇巴因结合肽的氨基酸序列为 :Leu - Leu - Ala - Asp - Thr - Thr - His - His - Arg - Pro - Trp - Thr 。 结论 : 哇巴因特异性结合肽氨基酸及 DNA 序列的获得 ,为哇巴因的研究提供了实验基础 ; 同时 ,本研究所采用的方 ( ) 法也为使用噬菌体随机肽库进行甾体类激素特异性受体 配体 的筛选提供了可靠的实验依据 。 [ 关键词] 　肽库 ; 哇巴因; 氨基酸序列 　　[ 中图分类号] 　R363 　　　　　[文献标识码] 　A 　　近年来噬菌体随机肽库已成为探索受体与配体 mol/ L NaHCO3 中 ,透析 72 h 。 之间相互作用的结合位点 。寻求高分子生物活性的 2 　生物淘筛 配体分子 ,特别是在受体或配体分子结构尚不明确 21 　亲和筛选 　每孔加入 100 μ L OUA - OVA 耦联 的情况下 ,噬菌体随机肽库技术显示出其特有的优 μ 物包被酶标板 ,4 ℃孵育过夜 。每孔加入 100 L 封 势和特点 。正因为如此 , 噬菌体随机肽库在蛋 白分 闭液封闭 ,4 ℃孵育至少 1 h 。每孔加入 TBST( TBS + 子相互识别的研究[ 1] 、新型疫