东亚三角涡虫RhoA基因的原核表达及组织定位-中国细胞生物学学报.PDF

中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2011, 33(7): 784–788 http ://www.cj RhoA 东亚三角涡虫 基因的原核表达及组织定位 聂　敏　赵博生* ( 山东理工大学生命科学学院发育与进化生物学实验室, 淄博255049) 摘要 为了表达东亚三角涡虫RhoA蛋白, 采用温控表达载体pBV220-IL 1, 构建了原核表达 重组质粒pBV220-IL 1-RhoA, 转化到E.coli DH5α中, 利用42 ºC热激诱导表达, 并进行了分离纯化 和Western杂交鉴定, 利用荧光免疫组织化学技术检测了在涡虫体内的分布。SDS电泳表明 诱导表达的融合蛋白约为18 kDa, Western杂交结果显示是目的蛋白, 荧光免疫组织化学结果表明 RhoA蛋白在东亚三角涡虫神经系统处表达。 关键词 东亚三角涡虫; RhoA; 基因表达; Western杂交; 荧光免疫组织化学 Rho (Ras-homologous) Ras 现, RhoA基因通过调节细胞粘着、头的形成和体轴 家族 是 超家族中的一 GTP GTP 形成来影响胚胎发育[11]; 在斑马鱼中发现它调控神 员, 编码的蛋白为 结合蛋白并具有 酶活性, G [1] RhoA Rho 经嵴的形成[12], 在胚胎期将RhoA基因沉默, 将会导致 简称小 蛋白 。 基因是 家族中研究较多的 一种[2] [3] 细胞凋亡, 斑马鱼的胚胎不能正常地发育[13]; 在对鸡 , 最早在海兔腹部神经基因组文库中发现 , 大 量研究表明其参与多种信号通路, 在信号转导中起 的研究中, 发现它可以通过调节神经胶质米勒细胞 分子开关的作用, 它的活性受鸟苷酸分离抑制因子 的形成来调控视网膜的形成, 从而影响眼的发育[14]; (Guanine nucleotide dissociation inhibitors, GDIs)、鸟 在小鼠胚胎中研究发现, Rho家族蛋白影响三胚层 苷酸交换因子(Guanine nucleotide exchange factors, 的分化和伪足的形成, 同时, 它可以激活一系列跟基 GEFs) GTP (GTPase-activating proteins, 因转录有关的酶来影响基因的转录[15]; 在人类中, 对 和 酶激活蛋白 GAPs) 的调节, RhoA蛋白在非活性GDP结合形式和 它与癌症的关系进行了大量的研究, 其中包括乳腺 GTP GDP 癌、食道癌及喉癌等, 研究发现RhoA蛋白在肿瘤的 活性 结合形式之间循环, 与 结合形式游离 GTP 形成、转化、生长、浸润以及 [16-17] 于细胞浆中, 与 结合形式则作用于细胞内的效 转移中起重要作用 。 应因子, 其效应蛋白主要为: 肌动蛋白核酸促进因子 其广泛存在性和较高的同源性表明该基因在物种发 (N-WASP WAVE) (IQGAP1 IQGAP2 育、进化及保持生物体正常生理功能方面具有重要 、 、接头蛋白 、 、 Par6)、激酶类(MRCK、ROCK)和脚手架蛋白Scaf- 的作用。 fold (Was、Diaph)等[4], 通过其参与的多种信号通路, 涡虫, 隶属扁形动物门, 首次出现两侧对称体 调节多种细胞生命过程, 其中包括细胞骨架重组、 制、三胚层和最原始的梯状神经系统, 同时也具有