东亚三角涡虫微管蛋白cDNA序列的克隆与生物信息学分析姚杨1黄原.DOC

东亚三角涡虫微管蛋白cDNA序列的克隆与生物信息学分析 姚　杨1　黄　原(2　苏　杰1 (1 西安医学院附属医院　西安　710077；2陕西师范大学生命科学学院　西安 710062) 摘要：运用SMART技术构建了东亚三角涡虫（Dugesia japonica）cDNA文库，从该文库中获得了东亚三角涡虫β微管蛋白基因全长cDNA序列，该序列全长1539 bp，编码444个氨基酸，5′非编码区域为71 bp，3′非编码区域为133 bp。序列同源性分析发现，推测的东亚三角涡虫与日本血吸虫（Schistosoma japonicum）、曼氏裂体吸虫（Schistosoma mansoni）和肝片吸虫（Fasciola hepatica）等8种扁形虫的β微管蛋白氨基酸序列相似性为92﹪-96﹪。编码蛋白的理论分子量为49.67 ku，等电点pI为4.82，属亲水性，主要定位于细胞质中，有24个磷酸化位点。结构上含有GTP 核苷酸结合位点（GGGTGSG）、N端的转录后调控信号序列（MREI）及β微管蛋白两个保守区域：NNWAKGHY和RKAFLHWYTGEGMDEMEFTE。 关键词：三角涡虫；β-微管蛋白；cDNA文库；生物信息学 Cloning and Bioinformatic Analysis of β-tublin cDNA of Dugesia japonica YAO Yang1 HUGANG Yuan*2 SU Jie1 (1The First Affiliated Hospital of xi′an Medical University, xi′an 710077 China; 2College of Life Sciences of Shaanxi Normal University, xi′an 710062 China) Abstract：A cDNA library was constructed from Dugesia japonica adult stage with the SMART (switching mechanism at 5′end of RNA transcript) technique. The complete cDNA sequnce of β tubulin was isolated from this cDNA library.The full length cDNA of β tubulin was 1539 bp, consisting of a 5′-noncoding region of 71 bp, a 3′- noncoding region of 133 bp, and an open reading frame of 1335 bp encoding a polypeptide of 444 residues .Sequence analysis reveals that the identity of β tubulin amino acid among Schistosoma japonicum, Schistosoma mansoni and Fasciola hepatica ranging at 92﹪-96﹪. The predicted molecular weight of β tubulin is about 49.7ku and pI 4.82. There is β tubulin signature sequence GGGTGSG and the two conserved amino acid sequence motifs NNWAKGHY at site 99 and RKAFLHYTGEGMDEFTE at site 405 of deduced aminoacid. Keywords: Degusia japonica；β-tubulin protein；cDNA library; Bioinformatic analysis 1.前言 三角涡虫（Dujesia japonica）是扁形动物门涡虫纲动物，因具有形态学的可 塑性及独特的再生能力成为再生生物学、神经生物学和发育生物学研究的模式动物[1]。近年来，涡虫研究进入基因组学和功能基因组学领域，这些研究有助于从基因组水平上揭示后生动物进化、发育和再生的共同机制[2]。微管是真核细胞骨架的组成成分，参与多种细胞功能：维持细胞形态、细胞内运输、鞭毛和纤毛运动、细胞分裂和染色体运动等[3]。自1969年微管蛋白被发现至今已经过去了40余年，微管蛋白由α、β微管蛋白，少量γ微管蛋白及少量微管结合蛋白组成，呈酸性[4-5]。α、β微管蛋白以异二聚体存在，保守性较高。γ微管