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雪白根霉脂肪酶基因在毕赤酵母中的高效表达及其酶学性质研究-溢多利.doc

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雪白根霉脂肪酶基因在毕赤酵母中的高效表达及其酶学性质研究 摘要:采用同源克隆法获得了雪白根霉的脂肪酶基因(rnl),将其连接到pPICZαA载体上,得到重组表达载体pPICZαA- rnl。将表达载体pPICZαA- rnl用限制性内切酶SacI线性化后,电击转入毕赤酵母X-33中。雪白根霉脂肪酶基因在毕赤酵母X-33中成功表达,重组菌株摇瓶培养144 h后,酶活可达48 U/mL。重组酶最适pH值为8.5,最适反应温度为35 ℃。1 mmol/L的Mn2+, Ca2+ 和K+ 以及1%的表面活性剂吐温20,吐温80,曲通100对重组脂肪酶具有激活作用。重组酶的最适底物为三月桂酸甘油酯(C12

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