一种新型沉淀剂去除肝素钠中蛋白质的条件研究.docx

一种新型沉淀剂去除肝素钠中蛋白质的条件研究江燕张力跃徐天瑞杨高潮摘要目的:探索YNB9921沉淀剂去除粗品肝素钠中蛋白质的作用条件。方法:通过效价测定、蛋白质鉴定和吸收度检测,考察不同条件下YNB9921沉淀剂的沉淀效果。结果:用0.05%沉淀剂、5%肝素钠溶液、效价80USPu/mg以上的粗品和pH3.0的条件,可有效地去除蛋白质,肝素钠活性损失2%左右。结论:得出YNB9921沉淀剂的最适作用条件,去除蛋白质效果明显。关键词肝素钠,沉淀剂,吸收度中图分类号R927.12StudyonConditionsforEliminatingProteinsfromHeparinSodiumwithaNewPrecipitantJiangYan,ZhangLiyue,XuTianrui,YangGaochaoDepartmentofBiology,YunnanUniversity(Kunming650091)AbstractPurpose:Toeliminateproteinsfromcrudeheparin,thereactiveconditionsofprecipitantYNB9921wereinvestigated.Methods:Themethodsofpotencyanalysis,proteinsprecipitateandtur2bidityidentificationaswellasabsorbancemeasurementat260nmand280nmwereused.Results:Un2dertheconditionsofpH3.0,5%crudeheparinsodiumand0.05%YNB9921,theproteinscouldbee2liminated.Conclusion:TheoptimumconditionsofYNB9921wereobtained.Itseffectwasobvious.KeywordsHeparinsodium,Precipitant,Absorbance我国的肝素钠生产几乎全部采用猪小肠为原料,在制取肝素钠无蛋白质产品和精品时,通常采用调低溶液pH,沉淀过滤去除酸蛋白的方法1,2。此工艺虽简单稳定,但会损失5%～7%的肝素钠活性。因此,寻找较好的方法,减少肝素钠活性的损失,具有现实意义。我们经反复研究,选择了一种较为理想的蛋白质沉淀剂,并就其去蛋白的条件进行了研究,解决了以上问题。家;沉淀剂,YNB9921型,系带负电荷的硫酯和硅化物的絮状沉淀剂,云南生物工程产业公司;其它试剂均为国产分析纯。1.2方法肝素钠效价的测定采用羊血浆法3,4。粗品、半成品和成品溶液中蛋白质的定性鉴定参照美国药典的三氯乙酸法3,并按中国药典方法5,分别在260、280nm波长处测定吸收度。2结果1材料与方法2.1沉淀剂浓度对去蛋白质和肝素钠活性的影响在肝素钠浓度4.5%、pH7.0条件下,用不同浓度的沉淀剂去除蛋白质,结果见表1。随着沉淀剂浓度的增加,沉淀蛋白质的作用增强,但肝素钠活性损失亦增加。当沉淀剂增至0.3%以上时,即可较完全地去除酸蛋白,但活性收率只剩余73.9%。2.2肝素钠溶液浓度对沉淀剂去蛋白效果的影响在pH7.0时,不同浓度的肝素钠溶液对去除蛋白质效果的影响见表2。随着肝素钠溶液浓度的增1.1材料肝素钠标准品,359USPu/ml,USPInc,批号30400,LotK24,配成8UPSu/ml溶液备用;肝素钠粗品,来自云南、四川、安徽和湖北的个体生产厂作者单位650091昆明,云南大学生物系(江燕);中国科学院昆明动物研究所(张力跃、徐天瑞);湖北省医药保健品进出口公司(杨高潮)收稿日期1999212213修回日期2000204203江燕,等.一种新型沉淀剂去除肝素钠中蛋白质的条件研究241加,虽然活性损失减少,但去除蛋白质的效果也随之变差。在5%浓度时,吸收度产生一个低谷,原因可能是此浓度有利于沉淀剂作用。表1不同浓度沉淀剂去蛋白质和对肝素钠活性的影响2.3粗品肝素钠效价对沉淀剂去蛋白效果的影响在沉淀剂浓度0.05%及pH7.0的条件下,不同效价的肝素钠去除蛋白的结果见表3。随着效价的增高,沉淀剂的效果增加,肝素钠活性损失随之愈少。当效价达到90USPu/mg以上时,活性损失在1.1%以下;达到120USPu/mg以上时,还可较完全地去除酸蛋白。2.4pH对沉淀剂去蛋白质的影响在肝素钠溶液浓度5%和沉淀剂浓度0.05%的条件下,不同pH去除蛋白质的结果见表4。当pH降到3.0以下,溶液出现蛋白质白色浑浊或沉淀。由表4可见,未加沉淀剂前,随着pH降低,蛋白质去除效果增强,但活性损失也增加。当pH为1.5时,可完全去除溶液中的酸蛋白,活性也降到95%左右。加沉淀剂后,在pH3.