五种药用石斛内生真菌抑制hiv-1整合酶活性研究-中国医药生物技术.pdf

36 中国医药生物技术 2013 年 2 月第 8 卷第 1 期 Chin Med Biotechnol, February 2013, Vol. 8, No. 1 DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2013.01.008 ·论著 · 五种药用石斛内生真菌抑制 HIV-1 整合酶 活性研究 祁婧，张大为，陈娟，康永，郭顺星 【摘要】 合酶抑制活性的筛选，旨在获得抑制 HIV-1 整合 目的 评价 5 种药用石斛内生真菌发酵产物抑制 HIV-1 酶活性高的代谢产物，为发现新的治疗艾滋病的药 整合酶的活性。 物途径提供参考。 方法 将分离自石斛的 202 株内生真菌提取物共 404 个 采用高通量 ELISA 法评价其抑制 HIV-1 整合酶活性；对 1 材料与方法 抑制活性大于 100% 的样品进行量效关系考察并进行体外 1.1 材料 抑制肿瘤细胞活性筛选。 本实验筛选所用的真菌菌株分离自束花石斛 结果 筛选得到 19 个对 HIV-1 整合酶抑制活性大于 （Dendrobium chrysanthum ）、流苏石斛 （Dendrobium 80% 的样品，其中样品 5119F 、5297F、5097F、5140J 和 fimbriatum ）金钗石斛（Dendrobium nobile ）、兜唇 5211F 的抑制率分别达到 117.96% 、113.53%、108.62%、 石斛（Dendrobium aphyllum ）、鼓槌石斛（Dendrobium 103.74% 和 109.02%，其对应的 IC50 值分别为 0.02024 、 chrysotoxum ）的根，采自云南西双版纳等地，均由 本实验室分离保藏。 0.003125、0.00862、0.01007 和 0.01192 mg/ml 。 Dynabeads 链霉亲和素磁珠 M-280 试剂盒和 结论 石斛属药用植物内生真菌是一个潜在的、丰富的用于 Dynal MPC-9 板式磁珠收集器购自美国 Dynal 筛选 HIV-1 整合酶抑制剂的资源库，值得进一步研究和 Biotech 公司；碱性磷酸酶标记地高辛抗体购自美 开发。 国 Sigma 公司；96 孔透明微孔板购自丹麦 Nunc 【关键词】石斛属； HIV 整合酶抑制剂； 药物评价， 公司。 临床前； 内生真菌 实验中所用的底物— 寡核苷酸链是由上海生 中国医药生物技术, 2013, 8(1):36-40 工生物工程技术服务有限公司合成、修饰并标记 的，具体序列见表 1 。 内生菌（endophyte ）是指存在于健康植物组织、 器官内并不引起明显病害症状的一类真菌[1] 。近年 表 1 实验所用的寡核苷酸的序列及修饰标记 来，研究发现植物内生真菌能够产生结构新颖、功 Table 1 The sequence of the study 能特殊的次生代谢产物，是新化合物、新药物的潜 寡核苷酸 序列（5→3 ）