植物组织培养四.ppt

第四章 植物组织器官培养技术 植物组织培养包括根、茎、叶、叶柄、花器、茎尖、幼胚、花药、花粉、果实等的无菌培养。 §1. 植物脱毒及快速繁殖技术§2. 花药及小孢子培养§3. 植物胚胎培养§4. 植物的离体受精§5. 组织培养常见问题及对策 §1.植物快速繁殖及脱毒技术 一、基本概念离体无性繁殖(propagation in vitro) ：利用离体培养技术，将来自优良植株的茎尖、腋芽、叶片、鳞片等器官、组织和细胞进行离体培养，在短期内获得大量遗传形状一致的个体的方法。也称之为微繁(micropropagation)、快速繁殖（rapid clone progagation）。单株无性系或单芽无性系：用上述方法得到的植株群体来自一个单株或单芽，他们的遗传组成相同，称为单株无性系或单芽无性系 二.研究意义 另一种是浸泡的方法，将切下的无根试管苗泡在含有高浓度生长素溶液中，生长素浓度为100毫克/升左右，浸泡时间从几小时到1天，然后取出接种于不加任何激素的MS培养基上或者扦插在人工基质上，十天左右即可生根。 一些难生根的植物用生长素加黑暗处理效果好。糖含量最好下降一半。 另外也可以将无根小苗直接嫁接到根系良好的砧木上。或者培养基中放置滤纸桥，使其略高于液面，靠滤纸的吸水性供应水和营养，从而诱发生根。  克服试管苗弱点，提高其移栽成活率的措施 A、移栽要抓三个关键 ①水分的平衡（不要失水过多） ②温度和光照（不能太高） ③光和能力逐步形成或加强 B、提高移栽成活率的技术措施 ①移栽前的工作 ②移栽时应注意的问题 b、嫁接法 a、试管沉淀反应 b、免疫双扩散 c、酶连免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA） D 分子检测法 （6） 影响脱毒效果的因素   2、热处理方法 （二）、应用领域（1）珍稀植物资源和育种原始材料，如工程植株、果树芽变分离（2）经济效益高，但难于繁殖的植物，如名贵花卉、（3）用于有性繁殖变异范围大而自然条件下又不易无性繁殖的植物，如非洲菊、花竹、紫罗兰等。（4）用于自然繁殖极易感染病毒的植物，如马铃薯、甘薯、甘蔗、香蕉、石竹、百合等等。（5）繁殖销量大，但用常规的方法难以满足数量上需要的植物，如草皮。 （二）、应用领域（1）珍稀植物资源和育种原始材料，如工程植株、果树芽变分离（2）经济效益高，但难于繁殖的植物，如名贵花卉、（3）用于有性繁殖变异范围大而自然条件下又不易无性繁殖的植物，如非洲菊、花竹、紫罗兰等。（3）用于自然繁殖极易感染病毒的植物，如马铃薯、甘薯、甘蔗、香蕉、石竹、百合等等。（4）繁殖销量大，但用常规的方法难以满足数量上需要的植物，如草皮。 四.植物的脱毒技术－基本原理 当前脱除植物病毒的方法有：茎尖培养脱毒法；热处理脱毒法；微体嫁接离体培养脱毒法；珠心组织培养法；愈伤组织脱毒（一）、茎尖脱毒1、茎尖脱毒的依据。病毒在植物体内分布是不均一的，越接近生长点约（0.1-1mm区域），病毒浓度越稀，因此有可能采用小的茎尖离体培养而脱除植物病毒。 2、茎尖培养法脱除植物病毒的技术关键 （1）、被脱毒植物携带病毒的诊断及其在体内的分布 再脱毒之前，应了解植物携带何种病毒，病毒在体内的分布位置，以确定培养茎尖的大小 （2）.母体植株的选择和预处理 母体的选择： 欲脱毒材料的品种典型性：关系到脱毒以后的脱毒苗是否保持原品种的特征特性 植体健康程度选择：应选感病轻、带毒量少的健康植株作为脱毒的外植体材料，这样更容易获得脱毒株。  外植体预处理： ?香石竹在38-40℃条件下经两个月处理可除去全部病毒。 ?菊花在35-38℃的条件下处理60天可使病毒失活。 ?马铃薯在37℃条件下处理10-20天能除去卷叶病毒。 柑橘－速衰病毒/黄化病毒40℃/30℃条件下处理7-12周。 鳞皮病毒需要在40℃/30℃条件下处理8周。 啐叶病毒需要在50℃条件下处理3-22小时。 洲青果病毒在50℃条件下处理30-40分钟。 （3）、茎尖的剥离??? 在切取外植体之前茎芽进行表面消毒。叶片包被严紧的芽，如菊花、兰花，只须75%酒精中浸蘸一下，而叶片包被松散的芽，如香石竹、蒜和马铃薯等，则要用0.1%次氯酸钠或升汞表面消毒10分钟。对于这些消