血型鉴定及交叉配血.ppt

实验十一：血型鉴定及交叉配血 医学检验学院检验基础实验室 实验内容 一、红细胞悬液的制备 二、ABO血型鉴定（试管法）和Rh血型鉴定 三、交叉配血（盐水介质和聚凝胺介质） 临床中： 一、红细胞悬液制备 常用浓度：1%、2%、5%、10%。 方法：①抗凝血 移去上层血浆待测 ②洗涤：剩余的红细胞中加5ML NS，混匀，洗涤 ，弃上清，此步骤重复3次，最后一次上清应清亮并全部弃去。 ③配制悬液。（根据要求浓度） 如：5%：洗涤后压积红细胞1滴+19滴NS，混匀 二、ABO血型鉴定： （一）、正定型 （二）、反定型 二、ABO血型鉴定（盐水介质）： 一、正定型 原理：用特异性血型抗体检测被检RBC,在盐水介质中发生肉眼可见的凝集，从而测定被检RBC膜上有无与特异性血型抗体相对应的抗原，进一步判定血型。 二、ABO血型鉴定： 一、正定型 方法： 1、试管法： 二、ABO血型鉴定： 正定型 判定结果： 试管法：轻轻摇动（或捻动）试管，使沉于管底的RBC浮起，观察有无凝集或溶血， 如上层清亮，管底有RBC凝块，轻弹管底，凝块无散开，为凝集（＋）； 如上层清亮，管底有RBC沉积，边缘整齐，轻弹管底，RBC浮起或成为均匀的RBC悬液，则为不凝集（一）； 若不确定，可将反应物倒在载玻片上，显微镜下观察。 注意：若上层为清亮的樱红色，考虑是否溶血 二、ABO血型鉴定： 二、反定型： 原理：用标准红细胞检测被检血清（血浆）,在盐水介质中发生肉眼可见的凝集，从而测定被检血清（血浆）中有无与标准红细胞相对应的抗体，进一步判定血型。 二、ABO血型鉴定： 二、反定型 方法： 1、试管法： 二、ABO血型鉴定： 结果判定： 二、ABO血型鉴定 凝集强度的判断见实验指导表格 注意：1、正反定型一致才能确定结果； 2、所用器材必须清洁干净，避免溶血，专型专用； 3、控制离心速度和时间，防止假阳性和假阴性； 4、抗原抗体比例要适当； 5、溶血时，注意结果的判定； 6、正反定型结果不一致时，不可轻易判定，需查明原因，可能有技术问题也可能有标本问题。 操作步骤 按照说明书进行 谢谢！ * * 待测 制成红细胞悬液，待测 3000r/min 5min 3000r/min 5min 加标准血清1滴 （-A -B ） 加红细胞悬液1滴（5%） 混匀，离心 观察结果 1000r/min 1min -A -B 加待测血清2滴 加标准红细胞悬液1滴 混匀，离心 观察结果（方法同正定型） 1000r/min 1min -A -B O — — AB ＋ ＋ B ＋ — A — ＋ 结果 抗B 抗A AB — — O ＋ ＋ A ＋ — B — ＋ 结果 B(RBC) A(RBC) 正定型 反定型 Rh（D）血型鉴定 原理：IgM型抗D标准血清与被检者RBC表面D抗原在室温条件下盐水介质中产生特异性反应，根据是否出现凝集判断是否有D抗原的存在。 Rh（D）血型鉴定 加抗D血清1滴 加红细胞悬液1滴（5%） 轻轻摇动玻片混匀，2min内判断结果，有凝集（＋），无凝集需按照说明书进一步实验确认是否为阴性 Rh（D）血型鉴定 注意事项： 1、按照试剂说明书操作 2、先加血清，后加RBC悬液，可通过视觉判断以免出现漏加抗D试剂导致的假阴性结果 3、观察结果时，应轻轻捻动试管，若用力摇动，可认为破坏弱凝集，误判为（一）性。 三、交叉配血 概念：供血者的血浆、红细胞与受血者的红细胞、血浆混合，观察有无凝集反应。 方法：盐水介质法、聚凝胺介质法、微柱凝胶法、抗人球蛋白法、酶介质法。 交叉配血： 主侧：受血者血浆+供血者红细胞 Ps：patient serum Dc：donor cell 次侧：供血者血浆+受血者红细胞 Ds：donor serum Pc：patient cell 受血者 献血者 Ps Pc Ds Dc 主侧 次侧 3%-5% 1% 一、盐水介质法 原理：ABO血型天然IgM类抗体与对应的RBC抗原特异性结合时，在盐水介质中出现肉眼可见的凝集。通过判断是否凝