衣原体实验室检测.ppt

生殖道沙眼衣原体感染 实验室诊断 生殖道沙眼衣原体感染-病原体 非淋菌性尿道炎（NGU)是指由性接触传染的一种尿道炎，它在临床上有尿道炎的表现，但在尿道分泌物中查不到淋球菌。 40-50%由沙眼衣原体引起，20-30%由支原体引起，尚有10-20%由阴道毛滴虫、白色念珠菌和单纯疱疹病毒等引起。 沙眼衣原体 .什么是沙眼衣原体?. 比病毒大但是比细菌小.有细胞壁，具有DNA和RNA两种遗传物质 .需要寄生于宿主细胞获取复制的能源物质 .有独特的发育周期：原体（有感染性)，网状体(无感染性). 女性感染 .增加对HIV的易感性 ..宫颈炎输卵管盆腔炎症.(无症状者75%) .肝脏感染肝周炎 .结膜炎眼部分泌物异常 .前庭大腺炎 .子宫内膜炎子宫分泌物异常不规则出血 异位妊娠 不孕 婴儿感染 .新生儿结膜炎: 分娩后6-10天眼部出现异常分泌物 .新生儿肺炎：可以导致肺功能损害 男性感染 .轻到中度的尿道炎:临床症状比淋病轻.尿痛－分泌物增多，血尿，尿频 .附睾炎: 急/慢?生育能力 .前列腺炎: 少见并发症 .反应性关节炎 男性感染2 .直肠炎：直肠－肛管疼痛，血性分泌物 .临床表现可以和Crohn’s病（克隆氏病）相似 .性病性淋巴肉芽肿（LGV） 沙眼衣原体感染-实验室检测 细胞培养 抗原检测试验；ELISA、快速抗原试验 直接免疫荧光法 核酸扩增检测(NAAT)法  一、细胞培养基本原理 沙眼衣原体自身不能产生腺苷三磷酸（ATP),需依赖于宿主细胞提供，其生活周期包括原体和始体（网状体）两个发育型。在适宜的培养条件下，衣原体吸附并进入敏感细胞，其原体在细胞中发育成始体，二分裂增殖形成胞质内包涵体，经染色后显微镜下可见包涵体。 衣原体的培养 评 价 敏感性70％～80％ 特异性100％ 缺点 费时（需3～5天），费力，技术要求高 不宜作为临床常规检查 不宜用于大规模的筛查和流行病学调查 二、直接免疫荧光法 评 价 敏感性70%～90% 特异性83%～99% 由于有可能将某些发光颗粒(白细胞、上皮细胞、色素颗粒)、细菌和酵母菌误认为沙眼衣原体，因此此法对于实验人员的技术水平要求较高 三、酶联免疫吸附试验 用酶联免疫为基础的方法检测临床标本提取物中的沙眼衣原体抗原 .广泛应用 所有的试验均基于对胞内脂多糖的检测 .脂多糖在结构上和质粒/DNA不同，.脂多糖是原体在宿主细胞中倍增，以及因此导致宿主组织破坏的结果，活跃的复制过程可以导致包涵体内大量脂多糖的释放。 脂多糖可以认为是活动的沙眼衣原体在宿主细胞内活动导致宿主组织破坏的标志 EIA –费用低 操作简便 .发展–通过早期的比较，近年来对抗体进行了改良和纯化 .目前细菌脂多糖干扰引起的假阳性已经很少见了 EIA 反应法(阳性EIA 反应) 可以用直接免疫荧光确认 离心，用沉淀物涂片，干片，固定，染色.紫外显微镜–典型的原体结构＝真阳性 EIA 敏感性75-80% 而PCR用于所有EIA没有反应的标本，20-25%的PCR阳性者主要为临床无症状者 四、抗原快速检测 优 点 简易，方便，快速，尤其适用于基层单位 缺 点 标本中需要足够数量的沙眼衣原体抗原，否则有假阴性结果 注意事项：按时间观察结果 五、显微镜检测法 基本原理 沙眼衣原体在宿主细胞内生长繁殖，形成包涵体。姬姆萨染色后，镜下可见细胞内包涵体。 临床意义 1、多用于新生儿眼结膜刮片检测，敏感性达95%。 2、不适宜用于泌尿生殖道标本的检查。 核酸扩增检测 核酸扩增技术是通过扩增沙眼衣原体的多拷贝基因（如隐蔽性质粒、染色体和RNA）检测病原体。方法包括 聚合酶链反应（PCR） 连接酶链反应（LCR） 等温链置换扩增技术（SDA） 转录介导扩增技术（TMA） 核酸序列扩增技术（NASBA） 实时荧光PCR等。 核酸扩增检测 核酸扩增检测具有很高的敏感性和特异性，世界卫生组织已推荐为扩大的生殖道沙眼衣原体感染实验室诊断的“金标准”。 核酸扩增检测不仅可用于宫颈、尿道标本中沙眼衣原体的检测，也可用于男女性尿液标本的检测。 开展核酸检测的实验室应通过有关部门考核取得开展临床核酸检测技术资格证。 临床意义 核酸扩增检测具有很高的敏感性和特异性，已被世界卫生组织推荐为扩大的生知道沙眼衣原体感染实验室诊断的“金标准”。 核酸扩增检测不仅可用于子宫颈、尿道标本中沙眼衣原的检测，也可用于男性和女性尿液标本的检测。 谢 谢! * *