美国Pickering柱后衍生仪-麻痹贝类毒素检测AOAC方法.pdf

双壳软体动物中麻痹贝类毒素的分析 高效液相色谱柱后衍生法（荧光检测） 甲壳类水生动物毒素是一组由腰鞭毛虫所产生的18 种次级代谢产物，它们多寄存在双壳软体动物中。腰鞭毛 虫的繁盛是季节性的，多出现在温暖的月份。因为传染往往是不可预测的，所以甲壳类水生动物应定期地进行监测。 吃了被感染的动物往往会导致麻痹性或瘫痪性的中毒，直接威胁生命。 用小鼠实验来检测鞭毛虫导致的神经毒素的方法有很大的缺陷，进而探索出液相色谱的分析方法。近来液相色 谱柱后氧化衍生在碱性条件下检测此毒素的方法被批准成为AOAC 新的官方方法-OMA2011.02 。三组毒素在梯度条 件下由C18 柱分离，生成的衍生产物很容易被荧光检测器检测到。Pickering 的柱后衍生检测麻痹贝类毒素的系统方 法符合AOAC Method 2011.02 ，如下： 方法 样品准备 1. 转移5g 已均质的贝类组织到50mL 离心管中，并加入 1N 的HCL 5mL; 2. 搅拌混合物，调节PH 到2-4 必要范围； 3. 开水浴加热混合物5 分钟，冷却至室温，重新检查PH 到必要范围； 4. 离心混合物，取上清液50uL 到微离心管中； 5. 加25uL 30%三氯乙酸（TCA）脱蛋白萃取，混合，离心； 6. 1M NaOH 调节pH 到2-4； 7. 0.2um 滤膜过滤进样。 分析条件 1. 柱：C18 柱,3.5um,4.6*150mm 2. 流速：0.8ml/min 3. 流动相：A:11mM 的庚烷磺酸钠，5.5mM 的磷酸，氢氧化铵调节pH 到7.1； B: 11mM 的庚烷磺酸钠，16.5mM 的磷酸，11.5%的乙腈，氢氧化铵调节pH 到7.1 柱后衍生条件 柱温：40℃ 反应器体积：1.0mL 反应器温度：85℃ 试剂流速：0.4mL/min 试剂：1. 100mM 磷酸，5mM 高碘酸，5M 氢氧化钠pH 至7.8 2 ．0.75M 硝酸 检测器：荧光检测器，λ ex ：330nm，λ em ：390nm HPLC GRADIENT PROGRAM TIME(MIN) %A %B 0 100 0 7.9 100 0 8 0 100 18.5 0 100 18.6 100 0 24 100 0