- 1、本文档共5页,可阅读全部内容。
- 2、有哪些信誉好的足球投注网站(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
树鼩载脂蛋白AV基因的克隆表达和纯化-中国动脉硬化杂志
CN43鄄1262/ R摇 中国动脉硬化杂志2013年第21卷第9期 775
[文章编号]摇 1007鄄3949(2013)21鄄09鄄0775鄄05 ·实验研究 ·
树鼩载脂蛋白AV基因的克隆、表达和纯化
1 2 2 2 1 2
王 艳 ,李国平 ,满 永 ,王 抒 ,涂 萍 ,黎 健
(1.南昌市第三医院内分泌代谢科,江西省南昌市330009;
2.卫生部北京医院卫生部北京老年医学研究所 卫生部老年医学重点实验室,北京市 100730)
[关键词]摇 树鼩;摇 载脂蛋白AV;摇 原核表达;摇 蛋白纯化;摇 His标签
[摘摇 要]摇 目的摇 构建树鼩载脂蛋白AV原核表达载体并利用His标签纯化该蛋白。 方法摇 从树鼩肝细胞中提取
总RNA,经逆转录合成cDNA 第一链,以cDNA 第一链为模板,扩增载脂蛋白AV基因。 PCR扩增产物和pET32a原
核表达载体经过双酶切,将纯化回收的酶切产物按适当的摩尔比通过T4 DNA连接酶16益连接过夜,连接产物转
化大肠杆菌感受态细胞Top10,挑克隆测序。 将克隆成功的载脂蛋白AV 重组质粒转化大肠杆菌表达菌株 BL21
(DE3),利用异丙基鄄茁鄄D鄄硫代半乳糖苷诱导表达,并优化诱导条件。 表达的载脂蛋白AV 经镍离子螯合树脂纯化,
采用BCA 法分析蛋白浓度,纯度测定采用聚丙烯酰胺凝胶电泳结合薄膜凝胶扫描分析获得。 结果摇 挑选的克隆
经测序证实载脂蛋白AV基因已经成功连接入pET32a原核表达载体中。 在大肠杆菌BL21(DE3)中经异丙基鄄茁鄄D鄄
硫代半乳糖苷诱导表达,有分子量大小约60 kDa的特异性蛋白产生,与预期大小一致。 重组蛋白诱导的最佳表达
时间为5 h左右,最佳浓度约在20 滋mol/ L。 镍离子螯合树脂柱亲和层析获得的纯化蛋白,经过聚丙烯酰胺凝胶电
泳后薄膜凝胶扫描分析显示目的蛋白的纯度在95%以上。 结论摇 成功构建了载脂蛋白AV 的原核表达载体,该蛋
白在大肠杆菌BL21(DE3)中实现了高效表达,纯化后的载脂蛋白AV 纯度约95%,为进一步研究其结构与功能奠
定了基础。
[中图分类号]摇 Q71 [文献标识码]摇 A
Cloning,Expression and Purification of Tree Shrew Apolipoprotein AV
1 2 2 2 1 2
WANGYan ,LI Guo鄄Ping ,MAN Yong ,WANG Shu ,TU Ping ,and LIJian
(1.Department of Endocrinology andMetabolism,The third Hospital of Nanchang,Nanchang,Jiangxi330009,China;
2.Beijing Hospital Beijing Instituteof GeriatricsMinistry of Health Key Laboratory of GeriatricsMinistry of Health,Bei鄄
jing 100730,China)
[KEY WORDS]摇 Tree Shrew;摇 Apolipoprotein AV;摇 Prokaryotic Expression;摇 Protein Purification;摇 HisTag
[ABSTRACT]摇 摇 Aim摇 To construct recombinant plasmid pET32a鄄apolipoprotein AV and purify the
您可能关注的文档
- 船舶结构不同应力点的应力概率模型-上海海事大学学报.PDF
- 朱子对中庸一篇结构的分析-东吴大学.DOC
- 艰难的国运与.PPT
- 本条例旨在实施〈生物多样性公约〉的卡塔赫纳生物安全议定书;管制.PDF
- 舟山群岛降水中阴离子及πΗ值的特征分析-环境科学.PDF
- 色那金矿石英二长闪长岩锆石U-Pb年龄与地球化学-吉林大学学报.PDF
- 良好格式序列的判断-Read.PPT
- 色谱峰拖尾案例.PPT
- 机械工程-武汉工程大学研究生处.DOC
- 机械原理电子教案版.PPT
- 第12课 大一统王朝的巩固 课件(20张ppt).pptx
- 第17课 君主立宪制的英国 课件.pptx
- 第6课 戊戌变法 课件(22张ppt).pptx
- 第三章 物态变化 第2节_熔化和凝固_课件 (共46张ppt) 人教版(2024) 八年级上册.pptx
- 第三章 物态变化 第5节_跨学科实践:探索厨房中的物态变化问题_课件 (共28张ppt) 人教版(2024) 八年级上册.pptx
- 2025年山东省中考英语一轮复习外研版九年级上册.教材核心考点精讲精练(61页,含答案).docx
- 2025年山东省中考英语一轮复习(鲁教版)教材核心讲练六年级上册(24页,含答案).docx
- 第12课近代战争与西方文化的扩张 课件(共48张ppt)1.pptx
- 第11课 西汉建立和“文景之治” 课件(共17张ppt)1.pptx
- 唱歌 跳绳课件(共15张ppt内嵌音频)人音版(简谱)(2024)音乐一年级上册第三单元 快乐的一天1.pptx
文档评论(0)