清华大学微生物试验室-em菌种.PPT

史上最快最全的网络文档批量下载、上传、处理，尽在：/ 细菌鉴定中常用的生理生化反应 实验目的和内容 了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常用的生理生化反应的测定方法； 通过不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分解利用情况，了解细菌碳、氮代谢类型的多样性； 了解细菌在培养基中的生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义； 学习各种接种技术。 实验原理 各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物存在差别。 细菌的这种代谢特点可供鉴别细菌之用。 用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生理生化反应。 实验仪器,材料和用具 实验仪器 37℃恒温培养箱。 微生物材料 大肠杆菌、变形杆菌、枯草杆菌、产气杆菌和未知菌种的平板各1个。 试剂 甲基红试剂、V.P.试剂、吲哚试剂 实验仪器,材料和用具 实验用具 试管：每个试验４根试管(３根接种，1根对照) 。 接种环、接种针、酒精灯、试管架、记号笔。 糖(葡萄糖、乳糖)发酵试验 葡萄糖/乳糖发酵培养基 成分：蛋白胨(或胰蛋白胨5g) 10g NaCl 2.5g 水 500ml 制法： 1．将上述成分混合于蒸馏水中加热溶解，矫正pH至7.4—7.6。 2．加葡萄糖/乳糖5g，加热溶解后加入0.5ml的1.6%溴甲酚紫乙醇溶液，混匀。 3．分装于80支试管内，每管5ml。 4．每管倒置一个杜氏小管，加盖，115℃灭菌30min。 *溴甲酚紫指示剂[pH 5.2(黄色)——6.8(紫色)] 糖发酵试验 取3支葡萄糖发酵培养基，分别标明发酵培养基名称、所接种的菌名和组号。1支接种大肠杆菌，1支接种变形杆菌，第3支接未知菌。 另取3支乳糖发酵培养基，标记。1支接种大肠杆菌，1支接种变形杆菌，第3支接未知菌。 接种后，轻轻摇动试管，使其均匀，并防止气泡进入倒置的杜氏小管。 将已接种好的培养基置37℃培养箱中培养24h。 观察各培养基颜色变化及杜氏小管中有无气泡。 甲基红试验 甲基红试验是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。 有些细菌(如大肠杆菌等)分解糖类产生丙酮酸，丙酮酸进一步反应形成甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH降低到4.2以下。 有些细菌(如产气杆菌)在培养的早期产生有机酸，但在后期将有机酸转化为非酸性末端产物，如乙醇、丙酮酸等，使pH升至大约6。 葡萄糖蛋白胨水培养基 成分：蛋白胨 2.5g 葡萄糖 2.5g 磷酸氢二钾 2.5g 蒸馏水 500ml 制法： 1．将上述成分混合于蒸馏水中，加热溶解后，调pH至7.2，以滤纸过滤。 2．分装于100支试管中，每管约5m1。0.06MPa 30min灭菌备用。 甲基红试验 取3支葡萄糖蛋白胨水培养基，标记。1支接种大肠杆菌，1支接种产气杆菌，1支接未知菌。 37℃培养 48h。 加甲基红指示剂数滴，观察结果。呈现红色者为阳性，呈现黄色者为阴性。 *甲基红指示剂[pH 4.4(红色)——6.2(黄色)] V.P. 试验(伏―普试验) V.P.试验是用来测定某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力。 葡萄糖蛋白胨水培养基 成分：蛋白胨 2.5g 葡萄糖 2.5g 磷酸氢二钾 2.5g 蒸馏水 500ml 制法： 1．将上述成分混合于蒸馏水中，加热溶解后，调pH至7.2，以滤纸过滤。 2．分装于100支试管中，每管约5m1。0.06MPa 30min灭菌备用。 V.P.试验 取3支葡萄糖蛋白胨水培养基，1号接种大肠杆菌，2号接产气杆菌，第3支接未知菌． 37℃培养 48h后。 加入40%KOH 5~10滴，然后再加入等量的5%α-萘酚溶液，用力振荡，再放入37℃温箱中保温30min，以加快反应速度。 观察培养基的颜色变化。若培养物呈现红色，为伏-普反应阳性。 吲哚试验 某些细菌，如大肠杆菌，能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸，产生靛基质(吲哚)，靛基质与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成玫瑰色靛基质(红色化合物)。 吲哚试验 色氨酸分解反应： 吲哚反应： 胰蛋白胨水培养基 成分：胰蛋白胨 5g 　NaCl 2.5g 　水 500ml 制法： 1．将上述成分混合于蒸馏水中加热溶解，矫正pH至7.4—7.6。 2．分装于80支试管内，每管5m1，　0.06MPa灭菌30min。 吲哚试验 取3支胰蛋白水培养基培养基，1号接种大肠杆菌，2号接种产气杆菌，第3支接未知菌 37℃培养24h～48h。 沿试管壁滴加数滴吲哚试剂于培养物液面，观察结果。 硫化氢试验 某些细菌能分解含硫的氨基酸(胱氨酸、半胱氨酸等)，