免疫标记技术1.ppt

免疫标记技术具有特异、敏感和快速的特点，不仅能定性、定量而且还能定位。 双抗体夹心法：检测抗原最常用的方法，适用于检测两个以上抗原决定簇的多价抗原。 间接法：是测定抗体最常用的方法。 竞争法：可用于抗原和半抗原的定量测定，也可对抗体进行测定。 捕获法：主要用于血清中某种抗体亚型成分（如IgM）的测定。 异硫氰酸（FITC）在紫外线下发出绿色荧光。罗丹明（RB200）则发出红色荧光。 FITC紫外线下可发绿色荧光，罗丹明RB200在紫外线下可发红色荧光。 * 优点：操作简便，特异性高，非特异荧光染色因素少。 缺点：敏感度偏低，每检查一种抗原需制备相应的特异荧光抗体。 * 优点：灵敏度高，在不同抗原的检测中只需应用一种荧光抗体。 间接免疫荧光试验（IFAT）是当前公认的最有效的检测疟疾抗体的方法。 * 是使抗原或抗体吸附于固相载体，使随后进行的抗原抗体反应均在载体表面进行，从而简化了分离步骤，提高了灵敏度，即可检测抗原，也可检测抗体 * （1）将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质。 （2）加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。 （3）加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。 （4）加底物：夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。 根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。 根据同样原理，将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物，即可用双抗原夹心法测定标本中的抗体。 放射免疫分析(R IA)是一项超微量分析技术(‘),是由yalow博士1959年发明，并于1977年荣获诺贝尔奖。它具有灵敏度高、特异性强、准确性和精密度好、简易快速等特点。能测定血液和生物体液中几百种微量物质。是其他分析方法无可比拟的 125I ： 60.2天 ， 3H： 12.3年， 14C ：5730年，35S：67.48天 ，32P：14.26天 医学免疫学实验四免疫标记技术 Immunolabeling Technique  主讲：谢永生 病原生物学与免疫学教研室 简 介 免疫标记技术(immunolabeling technique)是指用荧光素、酶、放射性同位素等对抗体或抗原进行标记，然后再通过检测标记物来观察抗原抗体反应的实验技术。 优点：特异、敏度和快速； 可定性、定量和定位 分 类 免疫标记技术 放射免疫技术 免疫酶技术 免疫荧光技术 免疫金标记技术 放射免疫技术 放射免疫技术为一种将放射性同位素测量的高度灵敏性和抗原抗体反应的高度特异性相结合，在体外测定超微量物质的一项技术 常用的放射性同位素有：125I、3H 、14C、35S、32P 三种方法： 基于竞争性结合反应的放射免疫分析(RIA) 非竞争性结合的免疫放射分析(IRMA) 放射受体分析技术（RRA） 放射免疫技术 放射免疫技术具有灵敏度高、特异性强、精密度好的优点，常用于各种激素、微量蛋白质、肿瘤标志物和药物等微量物质的测定，但具有放射污染的缺点。 免疫酶技术 免疫酶技术是将抗原抗体反应的特异性与酶的高效催化作用有机结合的一种方法。 常用的酶： 辣根过氧化物酶(HRP) 碱性磷酸酶(AP) 特点： -灵敏度高、特异性强、准确性好、试剂稳定和简易安全等优点。 免疫酶技术 酶联免疫 吸附技术 酶免疫组化技术 双抗体夹心法 双抗原夹心法 间接法 双位点一步法 分类 竞争法 免疫荧光技术 免疫荧光技术是用荧光标记的抗体或抗原与样品(细胞、组织或分离的物质等)中相应的抗原或抗体结合，以适当检测荧光的技术对其进行分析的方法 常用于标记的荧光素有：异硫氰酸（FITC）、罗丹明（RB200） 常用的方法有直接法和间接法两种  直接荧光法：把荧光素标记的抗体与待检标本（细胞悬液、细胞涂片或组织切片）相互作用，洗去未结合荧光标记抗体，在荧光显微镜下观察，有荧光的部分为阳性。 。 免疫荧光技术 间接荧光法：将特异性抗体（一抗）和待检标本（细胞悬液、细胞涂片或组织切片）相互作用后加入荧光素标记的一抗的抗体（二抗）显示结果。 免疫荧光技术 实验一酶联免疫吸附技术 ---双抗体夹心法测定甲胎蛋白（AFP) 酶联免疫吸附技术 酶联免疫吸附技术(enzyme linked immunosorbent assay, EL