茶树育种学（全套课件）.ppt

茶树育种学 全册完 一、原生质体的分离 （一）分离原生质体的材料：各个部位几乎均能分离出原生质体。 （二）原生质体的分离 1．材料的预处理：使游离的原生质体更能适应新的培养条件。 （1）预培养； （2）暗处理； （3）药物或添加物处理； （4）萎焉处理 第四节 原生质体培养与体细胞杂交 2．原生质体的分离 有机械法和酶法，一般采用酶法，常使用纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶，分别作用于细胞壁的不同组分。不同种类的植物，所需的酶的种类和浓度不同。 配制酶液须加入适量的渗透压稳定剂，代替细胞壁对原生质体起保护作用。有两类：一类为糖醇或可溶性糖；另一类为无机盐溶液。 分离时间和温度与不同植物材料、酶活力等有关。 酶法分离分为两步分离法和一步分离法。一步分离法较为常用，将所需果胶酶和纤维素酶混合配成溶液。 第四节 原生质体培养与体细胞杂交 二、原生质体的培养 （一）培养基及培养条件 KM培养基等，还应注意以下问题： （1）植物激素：2，4-D是最普遍的生长调节剂。 （2）原生质体的密度：一般采用103个/ml以上的密度。 （3）光照和温度：一开始应在黑暗中培养，再生成愈伤组织时，需要强光照。 第四节 原生质体培养与体细胞杂交 （二）原生质体的培养方法：单细胞培养的各种方法。 （三）原生质体的培养过程 分为三步：细胞壁再生、细胞分裂和植株再生。 愈伤组织形成后存在两条再生植株的途径。 第四节 原生质体培养与体细胞杂交 三、原生质体的融合 （一）原生质体融合的类型和方式 自发融合：酶分离原生质体过程中同种原生质体自然融合，形成同核体。 诱导融合：加入诱导剂或其他方法促进不同亲本的异种原生质体之间发生融合的过程。诱导融合不是没有亲缘界限的，在很大程度上取决于原生质体之间的亲缘关系和生理状态。 第四节 原生质体培养与体细胞杂交 （二）诱导融合的方法 物理方法：电融合（electrofusion）； 化学方法：（1）高pH高钙法；（2）多聚化合物法 第四节 原生质体培养与体细胞杂交 四、原生质体融合体的发育及杂种细胞的筛选 （一）原生质融合体的生长发育 经历以下四个过程： （1）异核体的壁再生； （2）异核体的核融合（nuclear fusion）； （3）融合细胞的增殖； （4）愈伤组织的器官分化 第四节 原生质体培养与体细胞杂交 （二）杂种细胞的筛选 产生了杂种细胞，要及时地从同时存在的双亲细胞和同源融合体的混合群体中把它们筛选出来，转移到适宜培养条件下进行培养，设计一种只允许杂种细胞生长的杂种筛选体系。 第四节 原生质体培养与体细胞杂交 互补选择法：利用两个不同亲本具有不同的生理或遗传特性，在形成杂种细胞时产生的互补作用进行选择。如激素自养型互补、营养互补、抗性互补。 机械分离法：根据双亲原生质体在颜色上的差别进行选择。 第四节 原生质体培养与体细胞杂交 五、体细胞杂种植株的鉴定 （1）形态学鉴定：体细胞杂种应具有两个亲本的形态学特征，或与两个亲本有区别。 （2）细胞学鉴定：融合后的原生质体应是四倍体（tetraploid）或双二倍体（double diploid）杂种。 第四节 原生质体培养与体细胞杂交 （3）生化鉴定：利用亲本的某些生物化学特性（如酶等）在杂种中的表达来鉴别体细胞杂种。 （4）DNA检测鉴定：每个物种都有特定的DNA分子图谱。 第四节 原生质体培养与体细胞杂交 第八章 分子育种 第一节 基因工程与育种 一、 基因工程的概念 二、 茶树基因工程的方法和步骤 三、 基因工程的安全性评价 第二节 分子标记与育种 一、 常用分子标记的原理和方法 二、 分子标记在茶树育种中的应用 一、 基因工程的概念 二、 茶树基因工程的方法和步骤 （一）目的基因的分离和克隆 （二）目的基因的转化 （三）转基因植株的鉴定 三、 基因工程的安全性评价 （一）安全性评价的意义 （二）转基因植物安全性评价 （三）转基因植物各阶段安全性评价申报要求 第一节 基因工程与育种 一、 基因工程的概念 基因工程：应用人工方法把生物的遗传物质（通常是DNA）分离出来，在体外进行切割、拼接和重组，然后将重组的DNA导入某种宿主细胞或个体，从而改变它们的遗传特性；有时还使新的遗传信息在新的宿主细胞或个体中大量表达，以获得基因产物。 第一