红树植物秋茄中受盐胁迫抑制的ccpin基因的鉴定与表达分析ylhloi.pdf

第36卷 第3期 实验 生物 学报 V01．36．No．3 2003年6月 ActaBiologiaeExperimentalisSinica June2003 红树植物秋茄中受盐胁迫抑制的 cyclophilin基因的鉴定与表达分析 黄 薇1，2 林栖凤 李冠一 赵文明 (西安交通大学生命科学与技术学院，西安 710049； 海南大学生物科学技术研究所，海口 570228) 摘要 利用代表性差异分析方法获得秋茄中两个编码亲环素(cyclophilin)蛋白的cDNA片段(称为 SRGKC2和SRGKC3)，该片段大小分别为282bp和 160bp；序列分析表明：SRGKC2和SRGKC3 是同一基因区域的不同长度片段，SRGKC3是 SRGKC2片段的一部分。SRGKC2在 84个氨基酸 范围内与大戟属cydophilin蛋白的氨基酸序列的一致性达到90％，SRGKC3在47个氨基酸范围内 与蚕豆cyclophilin蛋白的一致性达到93％。Northern分析表明：盐分抑制SRGKC2片段的表达。 依赖SRGKC2片段的序列资料，利用cDNA快速末端扩增(RACE)技术获取秋茄中cyclophilin基 因的全长cDNA片段(命名为KCCYP1)(GenBank登录号：AY150052)。该cDNA全长约为0．9kb， 含有一个516个核苷酸的完整开放阅读框，编码 172个氨基酸，等电点为8．57，分子量 18．2KDa。 42—49位氨基酸残基为推测的ATP／GTP结合位点A基序(P—loop)，48—54位氨基酸残基是插入 的7个氨基酸残基。文中还对SRGKC2在不同种中的表达状况进行了分析。 关键词：红树 秋茄 亲环素 eDNA 盐胁迫 本文2002年10月16日收到。2003年1月21日接受。 IDENTIFICATION AND EXPRESSION ANALYSiS OFTHECYCLOPHILIN GENE IN KA DELIA CAl DEL UNDER STRESS0FSALT HUANGWei， LIN QiFeng2 LIGuanyi2 ZHAOWenMing (InstituteofLifeScienceandTechnology， ’口．，∞ University， ’口 710049 Instituteofbiologicalscienceandtechnoolgy，HainanUniversity，Haikou 570228) ABS1 ACT TwocDNA fragments，namedforSRGKC2 andSRGKC3，encodingcyclophilin in KandeliacandelwereisolatedbyRepresentationalDifferenceAnalysisofcDNA．ThetwocDNA frag— mentswere282bpand160bp。respectively．SequenceanalysisshowsthatbothoftheSRGKC2and SRGKC3comefrom thes~rnegeneregion。and SRGKC3iSapartofSRGKC2．Inadditionthe SRGKC2displayed90％ sequenceidentityoveraregionof84aminoacidstothe cyclophilinfrom Eu— phorbiaeSUa／andthe SRGKC3displayed93％ sequenceidentityoveraregionof47aminoacidstothe fat祝bean．TheNorthernblottingshowedthattheexpressionofSRGKC2wassuppressedunderstress ofsalt．BasedonthesequenceofSRGKC2，aful1．1engthcDNA (KCCYP1)wasisolatedby