动物细胞培养-为龙.PPT

* * 2.2 动物细胞工程 单克隆抗体等 动物细胞工程常用的技术 动物细胞培养 动物细胞核移植 动物细胞融合 是其他动物细胞工程技术的基础。 为什么要进行动物细胞培养? 1.动物细胞培养 如何进行细胞培养? 2.2.1动物细胞培养和核移植技术 从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 1.1概念 1.2 动物细胞培养过程 胚胎或幼龄动物的组织器官 细胞悬液 10代细胞 50细胞 剪碎 胰蛋白酶 洗涤、稀释、分离 原代培养 用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。 比老龄动物的组织细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛。分化程度越低，繁殖能力越强，越容易培养。 动物细胞培养不能最终培养成生物体 细胞增殖缓慢，核型可能变化 动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。 贴壁生长 接触抑制 10代以内，保持正常二倍体核型 传代培养 细胞悬浮液 10代细胞 50代细胞 无限传代 原代培养 传代培养 细胞株 细胞系 原代培养和传代培养、细胞株和细胞系 多数组织细胞固定在表面生长和分裂。 随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖 多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的内环境的知识，思考以下问题： 1.体外培养细胞时需要提供哪些物质？ 2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件？ 讨 论 充足营养 适宜温度、PH和气体环境；无菌无毒环境 1.3 动物细胞培养的条件 （无菌处理和添加抗生素、更换培养液） 与体内相同。合成培养基：糖、氨基酸、促生长因子（血清、血浆）、无机盐、微量元素等 （36~37℃、7.2~7.4） （O2、CO2--维持培养液PH） 植物组织培养和动物细胞培养的比较 细胞株、细胞系 植物体 培养结果 获得细胞或细胞分泌蛋白 快速繁殖、培育无病毒植株 培养目的 葡萄糖 动物血清 蔗糖 植物激素 培养基特有成分 液体培养基 固体培养基 培养基性质 细胞增殖 细胞的全能性 原理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 1.4 动物细胞培养技术的应用 2.动物细胞核移植技术和克隆动物 将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体（克隆动物） 分 类 胚胎细胞核移植： 体细胞核移植： 细胞分化程度低，恢复全能性容易 细胞分化程度高，恢复全能性不容易 2.1 动物细胞核移植概念： 2.2体细胞核移植的过程： 请看教材P48图2-21 思考： 1.核移植的受体细胞是什么？处在什么时期？ 2.通过什么手段激活受体细胞，构建重组胚胎？ MⅡ中期卵母细胞 诱导方法：物理或化学方法激活受体细胞，完成细胞分裂和发育进程。 讨论： 1.在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？ 为使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部来自有重要利用价值的动物提供的体细胞，在供体细胞的细胞核移至受体细胞之前，必须将受体细胞的遗传物质去掉或将其破坏。 培养的动物细胞一般当传代至10～50代左右时，部分细胞核型可能会发生变化，其细胞遗传物质可能会发生突变，而10代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型。因此，在体细胞核移植中，为了保证供体细胞正常的遗传基础，通常采用传代10代以内的细胞。 2.用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，想一想，这是为什么？ 3.你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物，是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？ 绝大部分DNA来自于供体细胞核，但其核外还有少量的DNA，即线粒体中的DNA是来自于受体卵母细胞。 此外，即便动物的遗传基础完全相同，但动物的一些行为、习性的形成与所处环境有很大关系，核供体动物生活的环境与克隆动物所生活的环境不会完全相同，其形成的行为、习性也不可能和核供体动物完全相同，从这一角度看，克隆动物不会是核供体动物100%的复制。 2.3体细胞核移植技术的应用前景： 1、在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的进程 2、保护濒危物种 3、医药卫生领域生产医用蛋白质及组织器官的移植 4、了解胚胎发育和衰老过程；追踪研究疾病的发展过程和治疗疾病 2.4体细胞核移植技术存在的问题： *