和抗原修复细胞标本的取材.PPT

上皮性肿瘤标记 细胞角蛋白，CK 上皮膜抗原，EMA 桥粒蛋白，desmoplakins 间叶组织肿瘤标记 波形蛋白，vimentin 肌动蛋白，actin（HHF35） 肌球蛋白，myosin 结蛋白，desmin 肌红蛋白，myoglobin 肌源性调节蛋白，MyoD1 神经和内分泌细胞标记 胶质纤维酸性蛋白(GFAP) 神经纤维细丝蛋白(NF) S-100蛋白 神经元特异性烯醇酶(NSE) 髓磷脂碱性蛋白(MBP) 突触素(SYN) 嗜铬素A(CgA) 淋巴造血细胞标记1.共同标记: LCA 2. B细胞常见标记: 全B: CD20 CD5(MTZ), CD10, CD21, CD23, CDw32, CD35,IgM,IgD,ALP(MGZ) Ig重链: 抗μγα Ig轻链: 抗κλ 抗体有关注意事项 1．血清特异性检测 　 （1）放射免疫分析（RIA）、免疫扩散或电泳及ICC法 （2）系列稀释第一抗体法 2．抗体的选择 　 原则上应选择在较高稀释度时染色较佳而背景较低、结果稳定、重复再现良好的抗体。 目前供ICC研究用的抗种类繁多，制造商如林，不同的厂家的相同抗体，其价格、包装及抗体的最佳工作浓度，差异较大。 所以选购时，应多听取有经验者的建议，参考文献报告，并且自己应多查找不同厂家的抗体商品目录，恰当地选购自己所需的抗体。 3．抗体最佳稀释度的检测 抗原抗体反应要求一定比例，过量或不足，均不能达到预期的结果，所以ICC染色时，应进行抗体最佳稀释度的检测。 市售抗体所附说明书均标有工作液浓度，但实际上，厂商常常给较低的稀释倍数，因此应用时，可将所给工作液浓度稀释数倍至数百倍再进行系列染色，选择其中特异性染色最强、背景着色最低的释释度作日常ICC染色浓度。 在抗体来源不明、又无任何可供参考依据时，则可从原液至数倍稀释试用。 另外，酶标抗体/连结抗体和PAP复合物等也需要确定最佳工作液浓度。一般认为酶标抗体可用稍高浓度，例如HRP标记抗体为1：80～160、ALP标记抗体为1：50～100染色较理想。PAP法染色时，连结抗体稀释1：50、PAP复合物用1：50～200染色较合适。 4．抗体的保存 　 为确保ICC染色结果稳定、再现性良好，应避免抗体反复冻融所致的效价降低。 第一抗体分装、冷冻保存为佳，其最小包装可为每次用量或2周内用量。所分装的抗体，应注明名称，稀释度、量及日期等，同时应在笔记本详细记录。 ICC研究所用的任何抗体及酶，均应严格记录，妥善管理，才能保证实验成功。 增加染色强度方法 1．重复显色　　一般认为，对ALP标记抗体， 延长显色时间其反应可增强。 2．重复第一抗体　　 3．双桥PAP法(重复一次二抗和PAP)（Vacca 1982） 免疫组化技术的应用 一、免疫组化在肿瘤病理学的研究和诊断中的应用 1. 组织起源不明肿瘤的研究 如：Ewing 瘤，腺泡状软组织肉瘤 2. 研究病原体与肿瘤的关系 如：HPV与尖锐湿疣和子宫颈癌 HBV与肝癌 EBV与鼻咽癌 3. 协助确定肿瘤的良恶性 如bcl-2,Ig轻链用于淋巴瘤的诊断 4.测定肿瘤的增殖活性 如Ki-67, PCNA 5.肿瘤分期 如：laminin,FN,Ⅳ型胶原 Actin, calponin, p63显示乳腺肌上皮细胞 CK14,p63显示前列腺基底细胞 6.分化差的癌与肉瘤的鉴别 如未分化癌，恶性淋巴瘤，黑色素瘤和小细胞 肉瘤的鉴别可选用CK,vimentin,LCA和S-100 7. 癌基因蛋白的检测 ●肿瘤病因和发病机理的研究 ●肿瘤的诊断和预后 乳腺癌ER,PR,cerbB-2 胃癌c-erbB-2,P53,P21,c-myc,nm23 8. 确定转移性恶性肿瘤的原发灶 肺: TTF-1 乳腺:BRST-2/GCDFP-15 肝:HEP-PAR1 肠:CDX-2 甲状腺:TG, TTF-1,Calcitonin 前列腺:PSA 9. 恶性淋巴瘤白血病的诊断和分型 10.为制定肿瘤的治疗方案提供依据 抗CD20(Rituximab): B细胞淋巴瘤, 结节性淋巴细胞为主型 Hodgkin’s淋巴瘤的