复制家兔试验性DIC.PPT

家兔实验性弥散性血管内凝血 Experiment of disseminated intravascular coagulation (DIC) in rabbit 目的 应用静脉注射兔脑浸液方法，复制家兔实验性DIC。通过实验和几项血液学指标的测定及结果分析，了解实验室诊断DIC的常用方法，联系理论知识加深理深DIC的病因及发病机理。 实验内容 称重、固定（清醒状态）、局部浸润麻醉 手术：颈动脉插管，采集正常血标本 造模：i.v.2％兔脑浸液，60mg/kg（慢,2ml/min，注意兔子挣扎) 采集DIC血标本，离心分离血浆备用 测定样本：①KPTT,②PT,③Fg,④3P 结果汇总 测定指标和方法 白陶土部分凝血活酶时间（Kaolin partial thromboplastin time , KPTT）玻片法（挑丝法） 凝血酶原时间(prothrombin time, PT)玻片法（挑丝法） 纤维蛋白原（fibrinogen, Fg）含量，饱和盐水法 血浆鱼精蛋白副凝固试验（Plasma Protamine Paracoagulation test，3P） 清洁平皿和试剂37℃预热 滴加20ul血浆和20ul KPTT试剂,用清洁针头混匀预热3min 滴加20ul 0.025mol/L氯化钙溶液,立即启动秒表，同时用清洁针头不断混匀和挑拨 一旦挑出丝状物立即停止秒表记录时间（正常值35～45s） KPTT测定方法 清洁平皿和试剂37℃预热 滴加20ul血浆预热1min 滴加40ul PT试剂，立即启动秒表， 同时用清洁针头不断混匀和挑拨 一旦挑出丝状物立即停止秒表记录时间（正常值11～13s） PT测定方法 纤维蛋白含量测定方法 试管编号 1 2 3 4 调零管 测定管 调零管 测定管 生理盐水 4.5ml 4.5ml 饱和盐水 4.5ml 4.5ml 正常血浆 0.5ml 0.5ml DIC血浆 0.5ml 0.5ml 37℃孵浴3min，520nm波长比色，读取OD值 纤维蛋白含量测定方法 各加生理盐水4.5ml 各加饱和盐水4.5ml （调零管） （测定管） 1 4 2 3 正常血浆各0.5ml DIC血浆各0.5ml 3P试验 试管标记 1.正常 2.DIC 正常血浆 0.5ml DIC血浆 0.5ml 1％鱼精蛋白溶液 50ul 50ul 轻轻摇匀，37℃水浴孵浴15min，黑色背景观察沉淀物 结果 组别 KPTT (sec.) PT (sec.) Fg (mg%) 3P 正常 DIC 正常 DIC 正常 DIC 正常 DIC 1 2 3 4 5 注意事项 1.采血时不得将动脉夹移开，以免放血后不能及时夹闭动脉造成放血过量和失血。 2.采集抗凝血需掌握好血液:抗凝剂之比例(1:9)并充分混匀（颠倒混匀）。 3.注射兔脑浸液前，要做好第二次采血的一切准备工作，并向导管内注入生理盐水（因原来插管内可能已有血栓阻塞）。 4.注射兔脑浸液是实验成败的关键步骤，要缓慢推注(2ml/min)，密切注意家兔反应，如有明显的呼吸急促和躁动不安，应立即放血。 注意事项 5.离心分离血浆前，必须先平衡离心管。分离出血浆吸入清洁试管备用。 6.测KPTT、PT的平皿必须清洁、干燥、无油脂。KPTT试剂使用前须摇匀。 7.测Fg时，血浆一旦与饱和盐水接触。要立即进行充分混匀，以防产生局部沉淀，同样，比浊前亦要再次混匀。 8.测3P时，要先加血浆，再加鱼精蛋白，以免鱼精蛋白接触管底不洁物造成假阳性。 讨论 兔脑浸液引起DIC的原因和机制？ KPTT、PT、Fg和3P各指标的临床意义是什么？分别反应什么变化? KPTT、PT、Fg和3P的测定原理及发生变化的原因和机制? DIC动物模型的复制方法 凝血酶 蛇毒 兔脑浸液 内毒素 羊水 实验室诊断DIC的方法 筛选指标： 血小板计数（platelet，PLT） 凝血酶原时间(prothrombin time，PT) 纤维蛋白原含量（fibrinogen，Fg） 纤溶指标：FDP测定、3P试验、优球蛋白溶解时间、D-二聚体，等 实验室诊断标准(以下三项以上异常) PT延长或缩短3s以上，KPTT延长或缩短10s以上； 血浆血小板活化产物含量增加：β-TG、PF4、TXB2、P-选择素； 凝血激活分子标志物含量增加：F1+2、TAT、FPA、SFMC； 抗凝活性降低：AT-Ⅲ：A降低、PC活性降低； 血管内皮细胞受损分子标志物增高：ET-1和TM。