实验动物取血,尿液,其他体液的采集,实验动物的剖检方法.doc

名称：生物样品的采集及实验动物的解剖和脏器系数测定标准操作规程(SOP)关键词：生物样品的采集 实验动物 解剖 脏器系数测定目的：在药物毒理学研究中，常常需要收集实验动物的血液、尿液或其它体液进行常规检查或生化分析，因此，正确采集实验动物的生物材料是药物毒理学最基本和最重要的操作技术。对实验动物进行大体解剖检查是药物毒理实验的常规观察项目，简便易行并能提供重要资料。测定动物死后器官湿重和含水量是常用的指标之一，可以从大体标本大概地估计内脏器官病变的程度，特别适用于某些可致内脏水肿、实质细胞肿胀、间质纤维组织增生或脏器萎缩等药物的研究。组织匀浆的制备以及在匀浆技术的基础上发展起来的亚细胞结构分离技术，也是药物毒理实验的重要技术之一。学习和掌握药物毒理学试验中常用的生物材料的采集方法；实验动物的处死方法、大体解剖检查、脏器系数和含水量的测定以及组织匀浆的制备；了解病理切片常规收集样本的部位和方法。主体内容（一）血液的采集1、大鼠与小鼠的采血方法： 鼠尾采血：当所需血量很少时采用本法。固定动物并露出鼠尾，将尾部浸入45~50温水中数分钟，使尾静脉充血，擦干，再用酒精棉球擦试消毒。剪掉尾尖（约0.2~0.3cm），拭去第一滴血。然后用血色素吸管定量吸取尾血，或将尾血直接滴入容器内。采血完毕用干棉球压迫止血。亦可不剪尾，用7~8号注射针头连上注射器直接刺破尾静脉采血。 眼眶静脉丛采血：当需用中等量的血液，而又避免动物死亡时采用本法。左手拇指及食指紧紧握住大鼠或小鼠颈部，压迫颈部两侧使眶后静脉丛充血，但用力要恰当，防止动物窒息死亡。右手持玻璃毛细管从右眼或左眼内眦部以45°角刺入，刺入深度小鼠约2～3mm, 大鼠4～5mm。若遇阻力稍后退调整角度后再刺入，如穿刺适当，血液能自然流入毛细管内。得到所需的血量后，即除去加于颈部的压力，拔出毛细管，用干棉球压迫止血。断头采血：当需用较大量的血液，而又不需继续保存动物生命时采用本法。左手握住动物，右手持剪刀，快速剪掉头颈部，倒立动物让血液滴入容器。需注意防止断毛落入容器中。2、家兔采血方法： 耳缘静脉采血：本法为最常用的取血方法之一，可多次反复取血。将家兔固定于兔箱中，拔掉拟采血耳缘部细毛，用手指轻轻弹耳或电灯照射兔耳，使耳部血管扩张，然后消毒。左手压迫耳根，用针头刺破静脉或以刀片在血管上切一小口，让血液自然流出。也可直接用注射器进针耳缘静脉抽取血液。采血完毕用干棉球压迫止血，如一时不易止血，可用木夹夹住耳壳10~20分钟。 心脏穿刺采血：将家兔仰卧位固定在兔台上或由助手捉持，在左胸第2~4肋部剪毛，常规消毒。于第3~4肋胸骨左缘心跳最明显处穿刺，针头刺入心脏后即见血液涌入注射器。采血完毕迅速将针头拔出，这样心肌上的穿刺孔较易闭合，针眼处用酒精棉球压迫止血。体重2公斤的家兔每隔2~3周可重复采血10~20ml。股动脉采血：将家兔仰卧固定在兔台上，左手拉直动物后肢，右手持注射器，以血管博动为指标，将针头刺入股动脉。若已刺入动脉，即有鲜红色血液流入注射器。抽血完毕迅速拔出针头，用干棉球压迫止血。3、狗的采血方法： 后肢外侧小隐静脉和前肢皮下头静脉采血：本法最常用，且方便。后肢外侧小隐静脉位于后肢胫部下1/3的外侧浅表的皮下，由前侧走向后上侧，前肢皮下头静脉位于前肢脚爪上方背侧的正前方。抽血前，将狗固定在狗台上或使狗侧卧，由助手固定好。剪去抽血部位的毛，常规消毒。一人用力压迫静脉近心端或用止血带绑紧，使静脉充盈，另一人持注射器进行静脉穿刺。取得所需血量后拔出针头，以干棉球压迫止血。耳缘静脉采血：当需少量血液或作血常规检查时，可用狗的耳缘静脉采血法。剪毛后先将狗的耳壳加热，或用二甲苯棉球擦耳壳，然后以刀片切割已扩张的血管，使血液滴入容器。采血完毕，以干棉球压迫切割口以止血。4、采集血液的注意点： 实验动物一次采血量过多或采血过于频繁，都可影响动物健康，造成贫血甚至死亡，其最大安全采血量见表1。  采血方法的选择，主要取决于实验的目的和所需血量的多少，所需血量较少时可刺破组织取毛细血管的血，当需血量较多时可作静脉采血，若需反复多次静脉采血时，应自远心端开始。 若需抗凝全血，在注射器或试管内需预先加入抗凝剂，常用的抗凝剂有：A、草酸钾：常用于供检验用血液样品的抗凝。在试管内加饱和草酸钾溶液2滴，均匀浸湿管壁后，放入烘箱（80）烤干，包好备用。每管能使3~5ml血液不凝固，供钾、钙含量测定的血样不能用草酸钾抗凝。B、肝素：取1%肝素溶液0.1ml于试管内，均匀浸湿试管内壁，放入烘箱（80~100）中烤干。每管能使5~10ml血液不凝固。市售的肝素注射液每ml含肝素12.500 U，相当于肝素钠125mg。C、枸橼酸钠：3.8%的枸橼酸钠溶液1份可使9份血液不凝