《食品中单核细胞增生李斯特氏菌的定量方法》编制说明.docVIP

《吉林省食品安全地方标准 食品中单核细胞增生李斯特氏菌的定量方法》 一、任务来源 本标准对《食品卫生微生物学检验食品中单核细胞增生李斯特氏菌的定量方法》地方标准进行制定。受吉林省卫生厅委托。项目编号：DBS22/019-2012。 1.承担及参加单位 本标准负责起草单位：吉林省疾病预防控制中心。 本标准主要参加单位：长春市预防控制中心。 主要起草人：刘桂华、龚云伟、李月婷、赵薇 2.标准制定的主要过程： ⑴确立标准制定的基本原则，比较与研究国内相关检验方法的文献报道，并结合大量的实验室方法的研究工作，制定出标准的讨论稿。 ⑵组织有关参加单位进行实验室比队验证工作，结合比队结果，找出实验过程存在的问题，汇总、分析数据，修改标准文本。 ⑶撰写《食品卫生微生物学检验食品中单核细胞增生李斯特氏菌的定量方法》标准文本的《征求意见稿》和标准《编制说明》等材料。 ⑷把标准文本送给十位专家征求意见，汇总专家意见。根据专家意见对标准文本进行完善。 ⑸提交《食品卫生微生物学检验食品中单核细胞增生李斯特氏菌的定量方法》（送审稿）《编制说明》供卫生厅审议。 二、本标准立项背景 单增李斯特氏菌已成了新兴的重要的食源性疾病的病原菌，近几年来，包括我国在内的许多国家相继出现因李斯特氏菌而引起的食物中毒暴发事件，并且正逐年上升。因此受到各国政府高度重视，纷纷制定策略,开展监督监测工作，以便预防和控制该菌的污染、传播。 在我国已加入WTO的背景下，我国的食品安全质量将面临新的更大的挑战。为减少贸易壁垒，减少国家的名誉和经济损失，与国际接轨，提高检测能力，建立和研制发达国家公认的方法，势在必行。国外许多国家均建立了食品中L.m的定量方法或原则，规定了各种食品的限量标准（如美国规定了食品中L.m允许的水平下不能生长）。近些年中国对食品中L.m的量化方法仍停留在科学研究上。根据中华人民共和国食品安全法的明确规定，国家要建立食品安全风险监测制度，对食源性疾病、食品污染以及食品中的有害因素进行监测。这就要求尽快建立科学可行的单增李斯特氏菌（L.m）的定量检测方法。同时用定量方法对食品中的L.m量化，制定各类食品中该菌的限量标准，与国际标准尽早接轨。建立食品中单核细胞增生李斯特氏菌的定量方法，为制定食品的限量标准，开展食源性李斯特氏菌病在食品中的危害的风险评估提供依据，从而更科学的评价食物链中的危害与人体健康风险的相关性，完善与强化国家的食品安全体系。 三、本标准的主要依据： 经查FDA、USDA和我国均无相应国家标准报告。 1.GB4789.30-2010 食品微生物学检验 単增李斯特氏菌检验。 2.国内杂志公开报道的単增李斯特氏菌检验定量检验方法的文献。 四、增加的内容 本标准分为两种检测方法： 第一法：单核细胞增生李斯特氏菌平板计数法 第二法：MPN计数法 其中第一法适用于污染较严重的食品，第二法适用于单核细胞增生李斯特氏菌含量较低而杂菌含量较高的食品。 商品化鉴定系统的应用。该标准应用了Vitek GNI＋全自动微生物免疫分析仪）或API 1003试剂条1（法国生物梅里埃公司）或其他微量生化鉴定试条。这些方法都比较成熟，稳定性较好，已被许多国家和组织的标准采用，鉴定效果很好。 五、主要进行的实验室验证试验 1.人工染菌，利用平板法最低检出线的检测。 利用香肠、牛乳、生鲜猪肉、黄瓜、鲜虾五种样品，用一定浓度的単增李斯特菌进行人工染菌，按食品中单核细胞增生李斯特氏菌的定量方法中方法，利用李斯特显色平板、PALCAM平板，进行方法的验证试验，结果见表1. 总的来看李显最低检出限较 PAL最低检出限稍高。香肠和牛乳样品中回收率低，虽然杂菌量小，但由于这二种样品中含防腐剂，抑制了加标菌的生长，但样品经过稀释后受防腐剂影响小，反倒有加标菌的生长。 2.人工染菌，利用MPN法进行最低检出线的检测。 利用香肠、牛乳、生鲜猪肉、黄瓜、鲜虾五种样品，用一定浓度的単增李斯特菌进行人工染菌，按食品中单核细胞增生李斯特氏菌的定量方法中MPN法，利用李斯特显色平板、PALCAM平板，ALOA平板进行方法的验证试验，结果见表2.三种培养基的最低检出限相差不大，都是比较灵敏的。但ALOA培养基价格比较高，因此未采用。5种样品中染单增李斯特菌后用2种分离平板计数的检测结果（表1） 加活菌量 原倍 cfu/mL 10-、1 cfu/mL 10-2 、cfu/mL 加活菌量 cfu/mL 李显最低检出限 cfu/m L PAL最低检出限 cfu/m L 香肠 10-6 李显 PAL 李显 PAL 李显 PAL 28 40 1 3 1 0 510 1*10-9 3*10-8 10-7 1 0 0 0 0 0 51 10-8 3 2 0 0 0 0 5.1 牛奶