2010微生物计数培养基适用性检查记录.doc

表：2.1—054 微生物计数培养基适用性检查记录 1、适用范围：成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。 2、验证目的：培养基适用性检查试验目的是为了确定实验室所使用培养基、制备程序、保存条件等是否满足微生物限度检查用要求。 2、参照标准：《中国药典》2010年版、《中国药品检验标准操作规范》2010年版 3、验证项目：营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基和酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基 4、验证所用培养基： 分类 名 称 生产厂家 批 号 被检培养基 营养琼脂培养基 玫瑰红钠琼脂培养基 酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基 对照培养基 营养琼脂对照培养基 玫瑰红钠琼脂对照培养基 酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基 5、培养基制备：按规定程序新鲜配制营养琼脂（被检培养基和对照培养基）、玫瑰红钠琼脂（被检培养基和对照培养基）和酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂（被检培养基和对照培养基），灭菌后备用。 6、计数用培养基适用性检查试验用菌株 大肠埃希菌（Escherichia coli) ［CMCC（B）44102］金黄色葡萄球菌（StapHylococcus aureus)［CMCC（B） 26003］枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis ) ［CMCC（B） 63501］白色念珠菌 (Candida albicans) [CMCC(F) 98001]黑曲霉 (Aspergillus niger )　　　　 [CMCC(F) 98003] 7.2取经23-28℃培养24-48h的白色念珠菌的改良马丁液体培养物1ml, 加入9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍递增稀释至10-5-10-8，约为50-100cfu/ml的菌悬液备用。 7.3、取经25℃培养一周的黑曲霉斜面培养物，加0.9%无菌氯化钠溶液10ml，将孢子洗脱，然户，吸出孢子悬液，用垫有脱脂棉的漏斗（湿热灭菌）过滤，除去菌丝，收集菌液至另一无菌试管内作为菌原液，取此菌原液0.1ml加0.9%无菌氯化钠溶液9.0ml，稀释至10-5-10-8 ，每1ml约含孢子数小于100cfu的孢子悬液备用。 8、实验操作 8.1营养琼脂培养基：取7个无菌平皿，分别接种上述大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各2皿，每皿接种1ml菌液，另1平皿不接种菌作为空白对照，倾注对照营养琼脂培养基，混匀，凝固后于30～35℃倒置培养培养48h，计数；被检培养基同法操作。 8.2玫瑰红钠琼脂培养基：取5个无菌平皿，分别接种上述白色念珠菌、黑曲霉菌各2皿，每皿接种1ml菌液，另1平皿不接种菌作为空白对照，倾注对照玫瑰红钠琼脂培养基，混匀，凝固后倒置培养培养72h，计数；被检培养基同法操作。 8.3酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基：取3个无菌平皿，分别接种上述白色念珠菌2皿，每皿接种1ml菌液，另1平皿不接种菌作为空白对照，倾注对照酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固后倒置培养培养72h，计数；被检培养基同法操作。 9、适用性检查合格标准：若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态、大小应与对照培养基上的菌落一致，则判断该培养基的适用性检查符合规定。 10、结果 培养基 验证菌株 皿号 被检培养基cfu/ml 对照培养基cfu/ml 回收率% ≥70% 菌落形态 与大小 营养琼脂 （30～35℃，48h） 大肠埃希菌 1 2 平均 金黄色葡萄球 1 2 平均 枯草芽孢杆菌 1 2 平均 空白 1 玫瑰红钠琼脂 （23～28℃，72h） 白色念珠菌 1 2 平均 黑曲霉菌 1 2 平均 空白 1 酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂（23～28℃，72h） 白色念珠菌 1 2 平均 空白 1 11、结论：本次所检培养基上的菌落平均数 对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态大小与对照培养基上的 ，该培养基适用性检查 规定。 试验者： 复核者：