第二章 细胞培养液.ppt

第二章 细胞培养液 内容 水与平衡盐溶液 细胞培养基的基本要求 天然细胞培养基 合成细胞培养基 无血清技术及其培养基 其他细胞培养用液 细胞的生长需要一定的营养环境，用于维持细胞生长的营养基质称为培养基 它是提供细胞营养和促进细胞生长增殖的物质基础。细胞培养基其组成成分主要有：水、氨基酸、维生素、碳水化合物、无机离子及其他一些入核酸降解物、激素等 第一节 水与平衡盐溶液 1.培养用水:体外培养的细胞对水质特别敏感，对水的纯度要求较高。培养用水中如果含有一些杂质，即使含量极微，有时也会影响细胞的存活和生长，甚至导致细胞死亡。用金属蒸馏器制备的蒸馏水，可能会含有某些金属离子，一般不作为培养用水。配制培养用液应使用经石英玻璃蒸馏器三次蒸馏的三蒸水或超纯水净化装置制备的超纯水。。 2.缓冲溶液、生理盐水、平衡盐溶液 第二节 细胞培养基的基本要求 体外培养的细胞直接生活在培养基中，因此培养基应能满足细胞对营养成分、促生长因子、激素、渗透压、pH等诸多方面的要求 一、营养成分 维持细胞生长的营养条件一般包括以下几个方面： 1 氨基酸：是细胞合成蛋白质的原料 2 单糖：培养中的细胞可以进行有氧与无氧酵解，六碳糖是主要能源 3 维生素：主要扮演辅酶、辅基的角色，必不可少 4 无机离子与微量元素：细胞生长除需要钠、钾、钙、镁、氮和磷等基本元素，还需要微量元素，如铁、锌、硒、铜、锰、钼、钒等 常见的培养基： 1、MEM(minimum essential media) 含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺，8种维生素及必要的无机盐，成分简单，易于添加某种特殊成分适应某些特殊细胞的培养。 2、DMEM（ Dulbecco’s modified Eagle medium) 是由Dulbecco等人在MEM培养基的基础上研制而成。相比MEM增加了各成分的用量。分高糖型和低糖型，各自葡萄糖含量为4500g/L、1000g/L。高糖型有利于细胞停泊于一个位置生长，适合于生长较快、附着较困难的肿瘤细胞。 3、IMDM（Iscove’s modified Dulbecco’s medium） 含有42种成分，较DMEM增加了许多非必须氨基酸及一些维生素，增加了HEPES，葡萄糖含量为高糖型。适合于细胞密度较低、细胞生长较困难的情况，如白细胞融合之后杂交细胞的筛选培养，DNA转染后转化细胞的筛选培养。 4、RPMI1640 其成分较为简单，适合于许多种类细胞的生长，如肿瘤细胞或正常细胞、原代培养或传代培养的细胞。RPMI1640是目前应用最为广泛的培养基之一。 5、HamF10、HamG12 特点是在配方中加入了一些微量元素和无机离子，可以在加入很少血清的情况下使用，特别适合于进行单细胞分离培养。 HamG12培养基也是无血清培养基中常用的基础培养基 7、McCoy’s 5A McCoy’s 5A培养基是McCoy T.A等人在1959年研制成功的，是一种专门为肉瘤细胞设计的培养基，后来发现它特别适合于原代细胞培养，适合于较难培养的细胞的生长。 二、促生长因子及激素 各种激素、生长因子对于维持细胞的功能、保持细胞的状态（分化或未分化）具有十分重要的作用。有些激素对许多细胞生长有促生长作用， 如胰岛素，它能促进细胞利用葡萄糖和氨基酸。 氢化可的松可促进表皮细胞的生长 泌乳素有促进乳腺上皮细胞生长作用等。 三、渗透压 细胞必须生活在等渗环境中，大多数培养细胞对渗透压有一定耐受性。人血浆渗透压290mOsm/kg, 可视为培养人体细胞的理想渗透压。鼠细胞渗透压在320mOsm/kg左右。对于大多数哺乳动物细胞，渗透压在260－320mOsm/kg的范围都适宜 渗透压计 四、pH值， 气体也是细胞生存的必需条件之一，所需气体丰要是氧和二氧化碳。 氧参与三羧酸循环，产生能量供给细胞生长、增殖和合成各种成分。一些细胞在缺氧情况下，借糖酵解也可获取能量，但多数细胞缺氧不能生存。 二氧化碳既是细胞代谢产物，也是细胞所需成分，它主要与维持培养基的pH有直接关系。动物细胞大多数需要轻微的碱性条件 pH值约在7．2~7．4℃在细胞生长过程中，随细胞数量的增多和代谢活动的加强，二氧化碳不断被释放，培养液变酸，PH值发生变化。由于NaHCO3容易分解为二氧化碳，很不稳定， 五、无毒、无污染 体外生长的细胞对微生物及一些有害有毒物质没有抵抗能力，因此培养基应达到无化学物质污染、无微生物污染（如细菌、真菌、支原体、病毒等）、无其他对细胞产生损伤作用的生物活性物质污染（如抗体、补体）。 第三节 天然细胞培养基 天然培养基是指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基，如血浆、血清、淋巴液、鸡胚浸出液等。 目前广泛使用的天然培养基是血清，另外各种组织