江苏省邳州市第二中学高二生物导学案：DNA的粗提取与鉴定.doc

DNA的粗提取与鉴定 【重难点突破】 一DNA的理化性质有哪些 1．DNA的溶解性 DNA分子和蛋白质等其他分子在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。 DNA不溶于酒精，但细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一点，可以将DNA与蛋白质进一步分离。 DNA与蛋白质在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同。 溶解规律 2mol/L NaCl O.14mol/L NaCl DNA 溶解 析出 蛋白质 NaCl浓度从2 mol/L降低过程中，溶解度逐渐增大 部分发生盐析沉淀 溶解 由上表可以看出，在NaCl为2mol/L时DNA溶解，而部分蛋白质发生盐析而生成沉淀，通过过滤可除去部分蛋白质；NaCl为O.14 mol/L时，DNA析出，过滤可除去溶解的部分蛋白质。 2．DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响(DNA水解酶能水解DNA分子)，大多数蛋白质不能忍受60～80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性。洗涤剂能够分解细胞膜但对DNA没有影响。从细胞中提取DNA可用洗涤剂来破坏细胞膜。 3．DNA的鉴定 （1）二苯胺鉴定：在沸水浴的条件下，DNA被二苯胺染成蓝色。 (2)紫外线照射法：配制染色剂。用蒸馏水配制成万分之五的溴化乙锭(EB)溶液。将玻璃棒上缠绕的白絮状物抹于蜡纸上，再滴加1滴EB溶液染色；将蜡纸放在紫外灯(260 nm)下照射(暗室中)，可见橙红色的荧光(DNA的紫外线吸收高峰在280 nm)处。 【典题演示1】 1.（09江苏生物）下列关于DNA和蛋白质提取与分离实验的叙述，正确的有（ 　 ） A．提取细胞中的DNA和蛋白质都需用蒸馏水涨破细胞 B．用不同浓度NaCl溶液反复溶解与析出DNA可去除蛋白质 C．蛋白质提取和分离过程中进行透析可去除溶液中的DNA D．蛋白质和DNA都可以用电泳的方法进行分离纯化 【答案】BD 【解析】本题主要考查DNA与蛋白质在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度，以及血红蛋白分离及提纯和相关知识。A选项，在提取DNA时，如果是用动物的细胞需要用蒸馏水涨破，如果用植物细胞则不需要，而是用洗涤剂溶解细胞膜；用2 mol／L的NaCl溶液溶解DNA，然后过滤出蛋白质，再降低NaCl溶液的浓度，析出DNA。DNA和蛋白质样品都是带负电荷的，从负极向正极移动，移动的距离都和样品的分子量有关。C中透析用以出去小分子物质，DNA是大分子物质，D是常规方法比如用十二烷基磺酸钠，可以根据其分子大小及所带电荷性质进行分离纯化 【变式训练1】 1．（2010盐城三模）（多选）在“DNA的粗提取和鉴定”实验中，发现DNA提取量不足。下列有关原因分析正确的是 （ ） A．经蒸馏水处理的红细胞用玻璃棒搅拌的时间过短 B．用NaCl进行盐析，所调制的NaCl溶液浓度未达到2mol/L C．DNA再溶解时，玻璃棒搅拌方向是单向的 D．用玻璃棒搅拌时力量过猛 【答案】 【解析】 【变式训练2】、（2010盐城二模）在“DNA的粗提取和鉴定”实验中，甲、乙、丙、丁四个小组除下表中所列处理方法不同外，其他操作步骤均正确，但实验结果却不同。下列有关叙述不正确的是 组别 实验材料 提取核物质时加入的溶液 去除杂质时加入的溶液 DNA鉴定时加入的试剂 甲 鸡血 蒸馏水 95%的酒精（25℃） 二苯胺 乙 菜花 蒸馏水 95%的酒精（冷却） 双缩脲试剂 丙 猪血 蒸馏水 95%的酒精（冷却） 二苯胺 丁 鸡血 蒸馏水 95%的酒精（冷却） 二苯胺 A．实验材料选择错误的组别是丙 B．沸水浴后试管中溶液颜色变蓝的组别是甲、丁 C．甲组实验现象差的原因是25℃的酒精对DNA的凝集效果差 D．乙组实验不成功仅因为在鉴定时加入了双缩脲试剂 【答案】 【解析】 【变式训练3】、(2010南通二模)下图是“DNA粗提取与鉴定”相关实验步骤，请据图分析回答： （1）鸡血细胞是进行该实验较好的实验材料，这是因为_________________________。从鸡血细胞中释放出核物质的处理方法是_________________________。 （2）图a表示释放核物质后进行过滤的过程，过滤后取 进行下一步实验。 （3）图b表示的相关操作过程中，加入2mol/LNaCl溶液的作用是 。 （4）图c表示在滤液中加入冷却的95%的酒精，其目的是__________________________。 【答案】 二 以鸡血细胞为实验材料进行动物细胞中DNA的