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第二节 高效液相色谱法 高效液相色谱法(HPLC)是在传统色谱的基础上于20世纪70年代初快速发展起来的高效分离分析技术，目前已成为一种非常重要的分析方法，在复杂物质的高教、快速分离分析方面发挥着十分重要的作用，特别是对高沸点、热不稳定性有机化合物、天然产物及生化试样的分析方面有着其他分析方法无法取代的地位。 高效液相色谱法的特点 色谱分析法是分析化学中获得广泛应用的一个重要分支，从20世纪初俄国植物学家茨维特(M．S．Tswett)提出经典液相色谱法后，色谱分析法取得迅速发展。作为色谱分析法的一个分支，液相色谱包括传统的柱色谱、薄层色谱和纸色谱。20世纪50年代后气相色谱法在色谱理论研究和实验技术，而液相色谱技术仍停留在经典操作方式，其操作繁琐，分析时间冗长，因而未受到重视。20世纪60年代以后，随气相色谱法对高沸点有机物分析局限性的逐渐显现，人们又重新认识到液相色谱法可弥补气相色谱法的不足之处。20世纪60年代末随色谱理论的发展，色谱工作者已认识到采用微粒固定相是提高校效的重要途径，从而使液相色谱法获得新生。 高效液相色谱还可称为高压液相色谱、高速液相色谱、高分离度液相色谱或现代液相色谱。 与经典液相(柱)色谱法比较： 从分析原理上讲，高效液相色谱法和经典液相(柱)色谱法没有本质的差别，但由于它采用了新型高压输液泵、高灵敏度检测器和高效微粒固定相，而使经典的液相色谱法焕发出新的活力。 经典液相(柱)色谱法使用粗粒多孔固定相，装填在大口径、长玻璃柱管内，流动相仅靠重力流经色谱柱，溶质在固定相的传质、扩散速度缓慢，体入口压力低，仅有低柱效，分析时间冗长。 高效液相色谱法使用全多孔微粒固定相，装填在小口径、短不锈钢柱内，流动相通过高压输液泵进入高柱压的色谱，溶质在固定相的传质，扩散速度大大加快，从而在短的分析时间内获得高校效和高分离能力。 高效液相色谱法和经典液相(柱)色谱法的比较； 高效液相色谱法与气相色谱法的比较 高效液相色谱法与气相色谱法有许多相似之处。 气相色谱法具有选择性高、分离效率高、灵敏度高，分析速度快的特点，但它仅适于分析蒸气压低、沸点低的样品，而不适用于分析高沸点合机物、高分子和热稳定性差的化合物以及生物活性物质、因而使应用受到限制。在全部有机化含物小仅有20％的样品适用于气相色谱分析。 高效液相色谱法却恰可弥补气相色谱法的不足之处，可对80％的有机化合物进行分离和分析。 高效液相色谱法的优点 (1)分离效能高 由于新型高效微粒固定相填料的使用，液相色谱填充柱的柱效可达5×103一3×104块／m理论塔板数，远远高于气相色谱填充柱103块／m理论塔板数的柱效。 (2)选择性高 由于液相色谱柱具有高校效，并且流动相可以控制和改善分离过程的选择性。因此，高效液相色谱法不仅可以分析不同类型的有机化台物及其同分异构体，并已在合成药物和生化药物的生产控制分析中发挥了重要作用。 (3)检测灵敏度高 在高效液相色谱法中使用的检测器大多数都具有较高的灵敏度。如被广泛使用的紫外吸收检测器，最小检出量可达10-9g用于痕量分析的荧光检测器，最小检出量可达10-12g。 (4)分析速度快 出于高压输液泵的使用，相对于经典液相(柱)色谱， 其分析时间大大缩短，当输液压力增加时，流动相流速会加快，完成一个样品的分析时间仪需几分钟到几十分钟。 按分离过程物理化学原理分类的各种液相色谱法的比较 高效液相色谱仪 产品编号：0201-027K 规格型号：MODEL500生产产地：赛尔泰主 机 价：￥148000主机简介：科晓公司必威体育精装版引进的国际先进水平液相色谱仪基本配置：原装，双泵标准套主要特点：  1.科晓公司必威体育精装版引进的国际先进水平液相色谱仪  2.原装单元泵  3.恒流泵带自动排气泡装置  4.国际流行液晶显示 技术参数  泵的技术指标：  流量范围：0.001-10.000ml/min  准确度: ±1 % ul/min ?精度: 0.25 % (0.1 mL/min 至 10 mL/min.) 方法程序: 可编辑60 个方法，可运行复杂的梯度程序 摇控连动方式: 通过外部按点闭合控制 尺寸: 260mmX360mmX165mm 重量: 14 lbs. (6.3 kg) 电源: 85 to 264 VAC, 47 to 63 Hz, 60 watts 检测器的技术指标： 波长范围： 190-800nm 带宽： 6nm 波长精度： ±1nm 波长重复性?±0.1nm 吸收量程： 记录仪输出： 0.002AU/mV-2AU/mV 数据系统输出： 2AU/V 噪声：1x10-5AU(P-P) 条件：波长 254nm 流动相 甲醇 流量