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食品中腐败菌的分离纯化及生物学性状观察
微生物学大实验
食品中腐败菌的分离纯化及生物学性状观察
(标题小四黑体,正文小四宋体,段前、段后0, 行距20磅)
专 业
班 级
姓 名
同 组 人
日 期
0 前言
食品腐败变质是指食品受到各种内外因素(例如温度,气体等)的影响,造成其原有物理性质或化学性质发生变化,降低或失去其营养价值和商品价值的过程。食品腐败变质的过程实质上是食品中碳水化合物、蛋白质、脂肪在污染微生物的作用下分界变化、产生有害物质的过程。
本次实验以略微腐烂的苹果、栗子、香蕉,饮料为材料,运用三区划线、倾注、点植、涂布等方法从中分离出腐败菌,观察和分析其菌种及菌落形态。
1 试验材料和仪器设备
1.1试验材料
食材:土豆、苹果、栗子、香蕉、饮料。
试剂:营养琼脂粉、麦芽粉、琼脂粉、葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钠、溴麝香草酚兰溶液、草酸结晶紫、碘液、95%酒精、沙黄、生理盐水、0.1%吕氏碱性美蓝染液、自来水等。
1.2仪器设备
试验仪器:显微镜、蒸汽灭菌锅、恒温培养箱、试管、酒精灯、接种针(环)、针、培养皿、盖玻片、载玻片、三角玻璃涂布棒等。
2 试验方法
2.1培养基的制备
2.1.1营养琼脂培养基
称取4.5克营养琼脂粉,加入100ml水加热溶解,分装,在121℃下蒸汽灭菌。20min后取出导入无菌平皿中冷却凝固。
2.1.2土豆培养基
将去皮土豆200g切成2cm左右小块加入1000ml水煮沸10min,过滤补充水份,加入20g琼脂粉,20g葡萄糖,加热溶化,分装,121℃下蒸汽灭菌20min。
2.1.3麦芽汁培养基
称取5g麦芽粉加入100ml和2g琼脂,在115℃下蒸汽灭菌20min。
2.1.4糖发酵培养基的制备
2.1.4.1葡萄糖发酵管
取0.25g葡萄糖加入100ml的已配置好的糖溶液混合均匀即可.
2.1.4.2葡萄糖发酵管
取0.25g乳糖加入100ml已配置好的糖溶液混合均匀即可.
2.1.4.3麦芽糖发酵管
取0.25g麦芽糖加入100ml已配置好的糖溶液混合均匀即可.
2.1.4.4蔗糖发酵管
取0.25g蔗糖加入100ml已配置好的糖溶液混合均匀即可
2.1.4.5甘露醇发酵管
取0.25g甘露醇加入100ml已配置好的糖溶液混合均匀即可
注:糖溶液: 蛋白胨2g,0,04%溴甲酚紫水溶液2.5ml,蒸馏水100ml,调pH为7.4
分别吸取上述五种糖溶液5ml放在试管中,并放入一个小倒管.每种取两支试管.在培养箱中供糖发酵试验使用.
2.2 分离方法
2.2.1三区划线法
使用接种环,将其烧灼,待冷却后,取菌。然后在酒精灯附近,将已沾菌的接种环在琼脂表面密集而不重叠的来回划线,面积约占整个平板的1/3-1/2,此为第一区。 再将接种环上多余的细菌烧灼,待冷后,在第一区划线末端,再划下一区域,面积约占1/4面积,此为第二区。 用同样方法划第三区,划满整个平皿。?
2.2.2点植法
使用接种针,将其烧灼,然后在培养皿上点一下以降温,取菌。然后在酒精灯附近,将已沾菌的接种针在培养皿中点上一点。用相同的方法在培养基上点第二个点,直至培养基上呈现均匀的六个点。
2.2.3涂布法
使用三角玻璃涂布棒,在蒸汽灭菌锅内灭菌,待冷却后,取菌,然后将菌均匀的涂在培养皿上。
2.3 培养
2.3.1细菌
在37±1℃恒温培养箱中培养24小时。
2.3.2酵母菌
在28℃恒温培养基中培养48小时。
2.3.3霉菌
在28℃恒温培养基中培养48小时。
2.4 鉴定
2.4.1形态鉴定
①.细菌:做革兰氏染色试验。
涂片 将培养的不同菌分别做涂片,干燥、固定。固定时通过火焰1~2次即 可, 不可过热,以载玻片不烫手为宜。
染色 初染 加草酸铵结晶紫一滴,约一分钟,水洗。
媒染 滴加碘液冲去残水,并覆盖约一分钟,水洗。
脱色 将载玻片上面的水甩净,并衬以白背景,用95%酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止,约20~30s,立即用水冲净酒精。
复染 用番红液染1~2min,水洗。
镜检 干燥后,置油镜观察。革兰氏阴性菌呈红色,革兰氏阳性菌呈紫色。
②.酵母菌:
a.在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染液,按无菌操作法在营养琼脂培养基上取培养48小时的菌种少许,放在吕氏碱性美蓝染液中,使菌体与染液均匀混合。
b.盖玻片,放置3min后镜检。先用低倍镜观察,然后换用高倍镜观察菌体形
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