一乳酸菌细菌素.ppt

项目一：乳酸菌细菌素的制备;目录;乳酸链球菌的代谢产物能抑制乳酸菌，在以后的有关研究中发现，此代谢产物是细菌素。 细菌素(Bacteriocins)的含义可这样理解：由某细菌在代谢过程中通过核糖体合成机制产生的一类具有抑菌活性的多肽或前体多肽，抑菌范围不仅仅局限于同源细菌，产生菌对其细菌素有自身免疫性。 大多数乳酸菌在代谢过程中都能合成这种物质，通称为乳酸菌素，它具有抑制和杀死食品中多数革兰氏阳性致病菌和腐败菌的作用，少数乳酸菌素对革兰氏阴性菌有效。;乳酸菌的制备：;;任务二：乳酸菌的分离纯化;实验步骤：;2）、将样品以10倍稀释法稀释至10-7，取其中10-7、10-6 2个稀释度的稀释液各0.1~0.2mL，分别置于上述各营养平板上，用无菌涂布器依次涂布2至3个皿，置43℃培养48h，具体方法见基础技能。如出现圆形稍扁平的黄色菌落及其周围培养基亦为黄色者初???定为乳酸菌。 （3）将典型菌落转至脱脂乳发酵管， 43℃培养 8~24h，若牛乳管凝固， 无气泡，呈酸性，镜检细胞杆状 或链球状，革兰氏染色呈阳性， 则将其连续传代若干次，43℃ 培养，挑选出在3~4h能凝固的 乳管，保存备用。 ;乳酸菌素活性的测定采用牛津杯定量扩散法（又称管碟法）。选用Ф9.0cm平皿，将指示菌培养物与15mL融化且冷却至50℃左右的检测培养基混匀(指示菌最终为1.0×107CFU/mL)，倾入己放置好牛津杯的无菌平皿中，待琼脂凝固后用无菌镊子将牛津杯取出。调整乳酸菌发酵液pH值至2.0，离心后取上清液，100℃加热5min，取100uL该处理液，加入到检测平皿牛津杯形成的小孔中。在指示菌生长的最适温度下进行培养，观察并测定抑菌圈直径，并以以此表示乳酸菌素的活性。此外，为便于与Nisin进行比较，将乳酸菌素的活性单位定义如下：以藤黄八桑球菌1.880为指示菌，乳酸菌素溶液每产生1mm2抑菌圈而积称为1个活性单位；比活性定义为单位体积的乳酸菌素的活性单位。利用管碟法筛选出具有较高抑菌活性的乳酸菌。;乳酸菌的鉴定;谢谢观赏