09级细胞生物学技术.doc

1细胞培养的概念？习惯上泛指所有的体外培养，即器官培养，组织培养，和细胞培养的总称。 在无菌条件下,从动物(植物也可)或在人体中取出组织或细胞,置于模拟体内的生理环境中(无菌,适当的温度和一定的营养条件)使之生存和增殖生长的技术方法。用于研究细胞、组织的代谢、增殖、分化、形态和功能变化，各种理化因子对活细胞的影响。 2体外细胞的分化特点？细胞分化：在个体发育过程中，子代细胞产生形态、结构和功能差异的过程。（细胞的形态结构、生化特征、生理功能为细胞分化的三项指标），由于体外培养细胞失去了神经、激素等体液的调节和细胞间相互影响，经多次传代增殖，久之则发生如下变化:分化现象逐渐减弱或不显，形态与功能趋于单一化，或传一定代数后衰老死亡；发生转化，获不死性而成为能无限传代的连续细胞系或恶性细胞系。 3体外培养细胞的分型 ？并说明各自的形态特点?分型:1 贴壁型细胞(上皮细胞型,成纤维细胞型,游走细胞型) 2悬浮型细胞. 形态特点1.上皮样细胞型:仅形态上似体内上皮细胞，实际上不完全等于体内同名的细胞。来源：来源于外胚层，内胚层细胞 如：皮肤及其衍生物 ；消化道，乳腺，肺泡 ；上皮性肿瘤形态：类似体内的上皮细胞。扁平，不规则多角形，中有圆形核。生长特点：易相连成片，相靠—紧密相连—成薄层—铺路石状。生长时呈膜状移动，很少脱离细胞群而单个活动。2.成纤维样细胞型名称：凡在培养中形态与成纤维细胞类似的细胞来源：由中胚层间质组织起源的组织如：真正的成纤维细胞；心肌，平滑肌，成骨细胞形态：似体内成纤维细胞的形态 胞体梭形或不规则三角形胞质向外伸出2—3个长短不等的突起中有卵圆形核.生长特点： 排列成放射状，漩涡状 并不紧靠连成片， 细胞—细胞接触易断开而单独行动,游离的单独的成纤维样细胞，常有几个伸长的细胞突起.3.游走型细胞(不定型)：本型细胞在支持物上散在生长，一般不连成片。细胞质经常伸出伪足或突起，呈活跃的游走或变形运动，速度快且不规则.常见于羊水细胞培养的早期.4．悬浮生长型细胞 概念：培养时不贴附于底物而呈悬浮状态生长或以机械方法使保持悬浮状态下生长.来源:来自血，脾或骨髓，尤以血中白细 胞多见，癌肿细胞也可能。特点：在悬浮液中生长良好、细胞圆形，单个或小细胞团。优点：生存空间大，提供数量大， 传代方便(不需消化) 易于收获可获得稳定状态.缺点：观察不方便 很多细胞不能悬浮生长(尤以正常细胞) 4那些培养条件改变时，细胞形态可有变化？（见表一）组织和细胞供体年龄。培养条件。细胞的粘附。培养技术方法。促生长因子。组织和细胞供体年龄：幼年个体比老年者易于培养，所有动物的胚胎组织都是最好的培养对象。来自同一个体的组织，分化低的比分化高的容易培养。培养条件：不同的细胞对培养基需求不同，当前尚无一种培养基是万能的，应选择相应的培养基。应了解所培养细胞的生物学形状和特殊需求成分。血清，Hela：高血清成纤维细胞样低血清上皮样细胞。pH，Hela：太酸或太碱，成纤维细胞样；标准pH，上皮样细胞。细胞密度 3T3：低密度，成纤维细胞样，高密度，上皮样细胞。生长状态改变：悬浮或贴附：悬浮时圆形 ，贴附成纤维或上皮样。转化与否：未转化，成纤维样，转化后，可成上皮样。 5简述每代贴附生长细胞的生长过程分哪几期？游离期 ： 细胞接种后在培养液中呈悬浮 状态．也称悬浮期此时细胞质回缩，胞体呈圆球形。10分钟～4小时贴壁。潜伏期此时细胞有生长话动，而无细胞分裂。细胞株潜伏期一般为6～24小时。对数生长期：细胞数随时间变化成倍增长，活力最佳，最适合进行实验研究。停止期（平台期）：细胞长满瓶壁后，细胞虽有活力但不再分裂。机制：接触抑制、密度依赖性。（接触抑制：当一个贴壁生长的体外正常细胞生长至与另一个细胞的表面相互接触时，便停止了分裂增殖，相互虽然紧密接触，但不形成交叉重叠生长，也不进入S期。密度抑制（density inhibition）：细胞数量到一定数量后引起抑制增殖的现象。 6影响贴壁的因素和促进细胞粘附措施有哪些？1因素：（1）各种细胞强弱： (附着最强)巨噬细胞、成纤维细胞；上皮细胞、血细胞(最弱)。（2）生物因素：血清、培养液中的促附着因子。（3）机械，物理等因素（离心：促进附着。流动：培养液流动可阻止细胞附着。低温：可抑制附着）2措施：（1）包被：对分化程度高、生长能力差的细胞，可在培养瓶皿表面包被有利于细胞粘附和生长的生物活性物质. 血清内含有多种能够促进细胞粘附的成分，细胞本身也可能产生一些粘附分子。（2）减少接种时培养液的量：待细胞粘附和贴壁之后，再补充足够的培养液。（3）减少培养液中血清的含量，使培养液黏度降低。（4）培养液中离子成分及其浓度。如，培养液中的Ca2+含量过低时不利于细胞的粘附、贴壁和铺展。（5）培养液的温度: 低温会减