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细胞生物学实验课件 - 海南大学.ppt

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细胞生物学实验课件 - 海南大学

试管,棉塞,研体,烧杯,pH试纸,干燥器,高压灭菌锅,干燥箱,培养箱,真空泵,接种针,超净工作台,酒精灯,火柴,冻存管,安瓿管,吸管。 甘油,液体石蜡,干冰,培养基等。 哈氏弧菌。 三、实验材料 1、斜面保藏法 将菌种转接在适宜固体斜面培养基上,待其充分生长后,用牛皮纸将棉塞部分包扎好(棉塞换成胶塞效果更好),置4C?冰箱中包藏。 保藏时间依微生物的种类而定。霉菌、放线菌及芽孢菌保存2-4个月移种一次,酵母菌间隔两个月,普通细菌一个月,假单胞菌两周传代一次。 此法优点是操作简单、使用方便,缺点是保藏时间短、易被污染。 四、实验步骤 2、液体石蜡保藏法 将无菌石蜡加在已长好菌的斜面上,其用量以高出斜面顶端1CM为准,使菌种与空气隔绝。 将试管直立,置低温或室温下保存。 此法实用且效果较好。霉菌、放线菌、芽孢菌可保藏两年以上,酵母菌可保藏1-2年,普通细菌也可保藏1年左右。 3、穿刺保藏法 按穿刺接种方式培养菌种,菌种长好后用胶塞封严,置4℃冰箱存放。 四、实验步骤 4、砂土管保藏法 (1)河砂处理 取河砂若干加入盐酸10% ,加热煮沸30min除去有机机质。倒去盐酸溶液,用自来水冲洗至中性,最后一次用蒸镏水冲洗,烘干后用40目筛子过筛,弃去粗颗粒,备用。 (2)土壤处理  取非耕作层不含腐殖质的痩黄土或红土,加自来水浸泡洗涤数次,直至中性。烘干后碾碎,用100目筛子过筛,粗颗粒部分丢掉。 (3)砂土混合 处理妥当的河砂与土壤按3:1的比例掺合(或根据需要而用其他比例,甚至可全部作砂或土)均匀后,装入10x100mm的小试管或安瓿管中,每管分装1g左右,塞上棉塞,进行灭菌(通常采用间歇灭菌2--3次),最后烘干。 四、实验步骤 (4)无菌检查 每10支砂土管随机抽1支,将砂土倒入肉汤培养基中,30℃培养40h,若发现有微生物生长,所有砂土管则需重新灭菌,再作无菌试验,直至证明无菌后方可使 用。 (5)菌悬液的制备 取生长健壮的新鲜斜面菌种,加入2-3ml无菌水(每18x180mm 的试管斜面菌种),用接种环轻轻将菌苔洗下,制成菌悬液。 (6)分装样品 每支砂土管(注明标记后)加入0.5ml菌悬液(刚刚使砂土润湿为宜), 用接种针拌匀。 (7)干燥 将装有菌悬液的砂土管放入干燥器内,干燥器底部盛有干燥剂。用真空泵抽干水分后火焰封口(也可用橡皮塞或棉塞塞住试管口)。 (8)保存 置4℃冰箱或室温干燥处,每隔一定的时间进行检测。此法多用于产芽孢的细菌、产生孢子的霉菌和放线菌。在抗生素工业生产中应用广泛、 效果较好,可保存几年时间,但对营养细胞效果不佳。 5、冷冻真空干燥法 (1)冻干管的准备:中性硬制玻璃,烘干,灭菌。 (2)菌种培养:细菌芽孢脱落;放,霉孢子丰满。 (3)保护剂的配制:配制,灭菌,检查 (4)菌悬液的制备:2-3ml保护剂 (5)分装样品:菌悬液每管0.2ml (6)预冻:程序控温仪降温 (7)冷冻真空干燥:-50℃下抽真空 (8)取出样品:轻敲松散即达标 (9)第二次干燥: (10)熔封 (11)存活性检测:抽取一管进行存活性检查 (12)保存:4℃保存 四、实验步骤 1、液体石蜡保藏菌种的原理是什么? 2、 产孢子的菌种一般用哪一种方法保藏? 3、细菌用哪种方法保存的时间长面又不易变异? 4、经常使用的细菌菌种,应用哪一种方法保藏既好又简便? 思 考 题 实验十 海水养殖池塘水体中各类细菌总数的测定 1.学习水样的采取方法和各类水样细菌总数测定的方法; 2.了解水样的平板菌落计数的原则。 一、实验目的 本实验应用平板菌落计数技术测定水中各类细菌的总数。 由于水中细菌种类繁多,它们对营养和其他生长条件的要求差别很大,不可能找到一种培养基在一种条件下,使水中所有的细菌均能生长繁殖,因此,以一定的培养基平板上生长出来的菌落,计算出水中各类细菌总数仅是一种近似值。 二、实验的基本原理 灭菌的平皿(90cm),灭菌的

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