实用 第5次课.pptVIP

切片表面的反射光和切片下面的折射光之间，会 产生一种光学干涉的呈色现象，切片厚度呈现的 干涉颜色亦因之有别，根据这一原理就可以判断 切片的大致厚度。 一般情况下灰色及暗灰色的切片较薄，其分辨力 较高，但反差较弱且易于破裂;金黄色或紫色的切 片较厚，其反差较好，但分辨力较低;一般认为， 银白色的切片较符合理想，反差和分辨率均适中。 (3)切片厚度的判断 切片干涉颜色与切片厚度 干涉颜色　　　暗灰色　灰色　银白色　金黄色　紫色 切片厚度（nm） ４０以下　 　　　　　　　 ４０～５０ 　　　　　　　　　　 ５０～７０ 　　　　　　　　　　　　 ７０～９０ 　　　　　　　　　　　　　　　 ９０以上 * 七　切片 超薄切片是将固化的包埋块在超薄切片机上切为薄 片的过程(厚度约为5Onm)，它是整个制样程序的 中心环节。 超薄切片的好坏与切片机的性能、切片刀的质量、 包埋块的切割性能以及操作者的技术经验等因素 密切相关。 当进行超薄切片前，必须做好一切准备工作，如选 择和清洗载网、制备支持膜、制备玻璃刀、修整 包埋块等，开始切片时必须心境平稳，精力集中， 避免任何干扰（如随意离位、各种震动、人员往 来、尘粒污染等）。 超薄切片的操作过程与石蜡切片基本相似，但承载 切片的不是载玻片，而是具有透明支持膜的圆形铜 网，特殊切片还需用镍网、不锈钢网或银丝网。 铜网大都以电解法制成，直径3mm(少数为2mm)，网 孔的形状有园形、方形、单孔形、狭缝形等，网孔 的数目有50~400目多种规格。 超薄切片时一般选用200目铜网，网孔大者观察的 有效面积亦大，但其对切片的支持稳定性能较差。 因此如果观察分辨力要求高的样品时，则选用200 目以上的铜网，以增强样品的稳定性能。 1、选择与清洗载网 新铜网 可先用丙酮清洗数遍，而后再以无水乙醇清 洗几次，待干燥后使用。清洗的目的是去除铜网 上的油污，以便支持膜与铜网得以牢固的贴附。 旧铜网 凡使用过的铜网，均可经下法清洗以后，重 复使用: 酸洗法 放入盛有浓硫酸的小烧杯或锥形瓶内轻轻摇 动，约经1~3分钟后即可清洗干净。倒出硫酸，水 洗数次后，再用氨水清洗一次，用蒸馏水反复洗 涤数次。最后在无水乙醇或丙酮内清洗两遍，取 出平铺于滤纸上自然凉干待用。 铜网的洗涤处理因新旧而有不同 超声清洗法 先将旧铜网放入小烧杯内，以醋酸异戊酯或二 氯乙烷溶去火棉胶膜和Formvar膜，浸泡时间约半小 时。然后再放入盛有95％乙醇或丙酮的小烧杯内， 将超声波探头插入其内超声清洗。时间约5~10分钟， 超声波频率8Hz。 2.制备支持膜 铜网的网孔是很小的，但对于放置超薄切片及其它 样品来说，网孔还嫌大。又不足以平坦地支持切片。 所以要在铜网上复一层透明的薄膜，这层薄膜叫做 支持膜。 要求 支持膜在电子显微镜下不显示本身结构； 耐高温，能经受电子束的轰击，有一定的机械强度 膜要薄，一般为100～2OOA，不得超过2OOA。 类型 Formvar膜 火棉胶膜 碳膜 该膜的化学成分为聚乙烯醇缩甲醛(PVF)。 首先制备0.3%的Formvar二氯乙烯溶液(亦可用二氯乙 烷或氯仿)，然后用洗净的玻璃片伸入到该溶液中停 留片刻，平稳取出，自然干燥后玻片上形成一层薄 膜，再用针或刀片沿玻片边缘将此膜划破，继将该 玻片的一端浸入玻璃平皿的蒸馏水中，待玻片上的 薄膜完全漂于水面，把玻片轻轻下压取出。 再将铜网排列在膜上，用滤纸与铜网完全贴附后，用 镊子夹住滤纸的一角轻轻将其取出放于培养皿中， 待自然干燥后使用。 Formvar膜 Formvar膜的制备方法 制膜时玻璃片一定要光洁干净，否则Formvar膜不 能从玻片上脱落飘起； 制膜时室内湿度不能太大(60%)，否则易在膜上出 现微孔; 溶剂中不能混有水分与杂质，操作时应注意防止， 否则膜上会有许多斑点。 　　Formvar膜具有良好的透明度与机械强度，不易被电子束击破，因此为当前电镜制样最普遍采用的支持膜。 注意 常用1～3%火棉胶醋酸异戊酯溶液。 取市售的6%火棉胶溶液(系用酒精、乙醚配制)，加入 等量的醋酸异戊酯，即成3%溶液。 制膜时先取直径9～12cm的培养皿，盛满双重蒸馏水， 在水面上轻轻滴1～2滴上述溶液，醋酸异戊酯很快挥 发后，即可在水面上