组织细胞DNA降解及死亡时间的相关性的显微拉曼光谱分析.pdfVIP

第30卷，第6期 光谱学与光谱分析 01 and 2 0年6月 SpectroscopySpectralAnalysis June，2010 组织细胞DNA降解与死亡时间的相关性的显微拉曼光谱分析 熊 平1，郭 萍弘，张 静1 1．南华大学医学院法氏教研窜，湖南衡阳421001 2．南华大学数理学院，湖南衡阳421001 摘要为了给死亡时间推断的研究提供新的途径与数据，探讨了人死亡后组织细胞DNA含量变化与死后 时间间隔关系。将离体肾、肝组织置于特定环境中，在不同时间点提取离体组织，利用激光共焦显微拉曼光 谱技术和统计学方法，在拉曼位移测试范围内，对死后不同时间肾、肝组织DNA含量变化进行拉曼光谱检 测与统计学分析。结果显示：人死亡后48～72h，随着死亡时问的推移。肾、肝组织Raman光谱的主要散射 峰峰位没有明显变化，而其峰高有明显差异；所测组织的激光拉曼光谱特征峰的相对峰强值(J-州／Jz嘲)随 死亡时间的推移而减小。因此可以得出结论：人死亡后肾、肝组织细胞DNA含量随死亡时问延长呈下降趋 势，两者之间存在线性关系。 关键词显微拉曼光谱；DNA降解；死亡时间间隔(PMI)；相对峰强 中图分类号：0657．3文献标识码：A DOI：10．3964／j．issm1000-0593{2010)06—1511—05 引 言 1材料与方法 Interval，PMI) 死亡时间即死后经过时间(postmortem 1．1样本采集及制备 的推断是法医检案实践中要解决的重要任务之一。目前，国 本实验的样品均取自尸检标本，共取8例尸体，其死亡 内外法医学者运用多种技术手段推断死亡时间，但无论哪一 时问及死亡原因(猝死、机械性损伤、中毒或电击等急速死 种方法都有其不完善的地方和难以解决的问题(I‘3]。PMI的亡的尸体)均明确。将人体离体肾、肝组织标本置于温度为 精确推定在现代刑事案件的侦破等方面起着关键性的作用。 15℃，湿度为RH65％的实验条件中，以死后48h为第一次 人体细胞中的溶酶体含有各种水解酶，特别是组织蛋白水解 取材时间，分别取48，52，56，60，64，68，72h的肺、肝脏、 clnX 酶和水解核酸、多糖的酶等。人体在死亡后由于新陈代谢的 脾脏和肾脏组织标本，大小约2cm×2 0．3crll，放人 停止，组织、细胞失去牛存功能。溶酶体将各种水解酶急剧 10％甲醛中固定并编号标记，然后再脱水、透明、浸蜡处理 释出，使组织蛋白质和核酸等高分子化合物以及糖蛋白等复 后用石蜡包埋，制成蜡块，切片，最后封片，制作成病理切 合物逐渐降解。随着分子生物学的飞速发展，尸体组织样本 片标本供激光共聚焦显微托曼光谱仪检测。 中这螳复合物的时间依赖性降解已成为目前研究死亡时间的 1．2试验仪器及测定条件 焦点。国内外的法医学学者开展了根据人体死亡后组织内分 子化合物及其他复合物的含最进行死亡时问推断的研究[4_9]。共聚焦显微拉曼光谱仪。采用Ar+激光器的532nlTl线作为 本文利用激光共聚焦辊微拉曼光谱技术测定组织内不同的有 激发源，功率为20肛w，积分时间为50S，拉曼光谱测量范 500 机分子化学基团的振动光谱，准确地检测出组织中所含的化 围70～4 cln～，激光聚集光斑范围50 fIm×l0