一种水华蓝藻气的分离纯化及气囊结构蛋白的鉴定.PDF

微生物学通报 Aug. 20, 2017, 44(8): 1802−1807 Microbiology China /wswxtbcn tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.160797 研究报告 一种水华蓝藻气囊的分离纯化及气囊结构蛋白的鉴定 许柏英1,2* 苗娅1 (1. 重庆师范大学生命科学学院 重庆 401331) (2. 中国科学技术大学生命科学学院 安徽 合肥 230026) 摘 要：【目的】从水华蓝藻铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa PCC 7806)的细胞中分离纯化出高 纯度且完整的气囊，并对气囊的结构组成蛋白进行鉴定。【方法】采用渗透冲击与溶菌酶处理相结 合的方法，进行多次低速离心提纯气囊，纯化所得气囊用负染色透射电镜观察气囊的纯度、完整 度和形态。将纯化得到的气囊溶解后进行SDS电泳，电泳后的蛋白条带运用LC-MS 质谱法 完成鉴定。【结果】从气囊的电镜照片可以看出提纯后的气囊纯度高，完整性好。气囊是两端呈锥 状的圆柱体状，各气囊的直径大小一致，约120 nm，但长度不同，从约500 nm 到1 500 nm 不等。 SDS电泳和质谱法鉴定出气囊的两种主要结构组成蛋白GvpA 和GvpC。【结论】这些研究 对后续揭示气囊的精细结构和深入研究水华蓝藻浮力调节机制具有重要的意义。 关键词：铜绿微囊藻，气囊，分离纯化，结构蛋白，电镜观察，质谱鉴定 Isolation and structural proteins determination of gas vesicles from a bloom-forming cyanobacterium XU Bo-Ying1,2* MIAO Ya 1 (1. College of Life Sciences, Chong Qing Normal University, Chongqing 401331, China) (2. School of Life Sciences, University of Science and Technology of China, Hefei, Anhui 230026, China) Abstract: [Objective] In order to isolate high-purity and intact gas vesicles from the cells of bloom-forming cyanobacterium Microcystis aeruginosa PCC 7806, and to identify structural proteins of gas vesicles. [Methods] Osmotic shock combined with lysozyme treatment and low speed centrifugation were used to isolate and purify gas vesicles. The purity, integrity and characteristic shape of gas vesicles were examined by negative staining and transmission electron microscope. The structur