使用表面带电杂化CSHC18色谱柱提高反相肽分离的峰容量-Waters.PDF

[ 应用纪要] 使用表面带电杂化(CSH)C18色谱柱提高反相肽分离的峰容量 Matthew A. Lauber, Stephan M. Koza, 和 Kenneth J. Fountain 沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德) 应用优势 引言 ■ 反相肽分离的峰容量更高 无论是通过自上而下的蛋白质组学对蛋白质进行研究1还是运用 2 肽图表征生物药物 ，肽分离技术都极其重要。这些分析中所遇 ■ 与甲酸流动相兼容 到的混合物均具有内在的复杂性。因反相(RP)色谱法具有较高 ■ 有应用于UPLC®和HPLC的两种颗粒 的分辨率，并且能够轻松地与质谱法(MS)衔接，它已成为首选 ■ CSH130 C 18 使用细胞色素c的胰蛋白 的分离方法。 酶消化液进行QC检验 与梯度反相色谱关系最紧密的性能指标是峰容量，或在梯度时 间内的最大峰数量3 。有趣的是，除使用较小的填料颗粒外，对 固定相进行化学修饰也可以对峰容量产生显著的影响。例如， 表面带电杂化(CSHTM )C 18色谱柱的化学特性是对亚乙基桥杂化 4 (BEH)C18 固定相的改进 ，因为除了C 18键合相外，其表面经修饰 5 后还带有低水平的正电荷 。业已表明，这种修饰能够改善离子 5-10 化小分子的峰形、载量行为和峰容量 。 在本研究中，我们评估了CSH130 C 18的肽分离特性，期望能够在 色谱性方面得到相似的改善，因为在常用的酸性条件下，大部 分肽都带有正电荷。针对肽所做的研究表明，与肽分析中先进 的固定相相比，这种新型的固定相能够具有更大的峰容量、独 沃特世解决方案 一无二的选择性，并且对MS信号的依赖性更低。 ACQUITY UPLC® H-Class Bio 系统 Xevo® G2 QTof质谱仪 ACQUITY UPLC CSH130 C18 1.7 µm色谱柱 XSelect™ CSH130 C 18 XP 2.5 µm色谱柱 MassPREP™肽混合物 经LCGC认证的内插管透明玻璃样品瓶 关键词 反相、肽、三氟乙酸(TFA)、 甲酸(FA)、离子对、表面带 电杂化(CSH)、峰容量 1 [ 应用纪要] 实验 LC条件 系统： ® Waters ACQUITY UPLC 柱温：