【2017年整理】4、(柴海毅)微生物检验方法适用性试验.pdf

1105 非无菌产品微生物检验方法 适用性试验 柴海毅 为什么要做方法适用性试验？  与国际通用要求接轨  促进微生物检验定量化  推进微生物检验标准化  提升药品质量的要求 培养基适用性检查  范围： - 成品培养基（新引入概念） - 由脱水培养基制成的培养基 - 按处方配制的培养基 计数方法适用性试验：  实质：微生物计数方法验证。  几个数字要求： - 接种菌悬液的体积不大于供试液的1% - 菌悬液含菌量不大于100cfu - 抗菌或抑菌活性的标准：回收率低于50% 微生物测试方法  平皿法 1、倾注发； 2、涂布法  薄膜过滤法  MPN法 涂布法  新引入的方法  关键点：涂布供试液不少于0.1mL. 非无菌产品微生物限度检查： 控制菌检查法 培养基适用性检查  培养基促生长能力检查 分离培养基在规定的最短时间内促生长能力考察。  培养基抑菌能力检查 分离培养基在规定的最长时间内的抑菌能力考察。 检验方法适用性试验  实质：控制菌检验方法验证。  适用性试验： 规定最短时间培养，试验菌检出能力试验。 供试品检查  规定最长时间下的控制菌试验。 验证目的  - 在于确认（寻找）一种有效的检验方法， 如果样品（药品）中有一定数量的微生物 存在，那么采用此法可以使得样品（药品 ）中的微生物得以检出。  - 充分验证样品（药品）本身对微生物生长 的影响。 方法适用性试验的目的  确认一种检验方法。 验证实验 检验条件 检验方法 样品量 稀释液种类 稀释液体积 检验规程 中和剂 SOP 培养基 培养时间 培养温度 …… 影响微生物检验的因素  微生物检验的检出率很低下  样品/药品自身的特殊性  样品/药品中添加的防腐剂/抑菌剂  培养基的特性  培养条件  人员因素  实验器材的选择 恢复试验  微生物方法适用性试验的实质就是评价 和考察微生物恢复试验（恢复生长）的 可信度。  恢复试验就是确认某一检验方法，它可 以使加入其中的各种微生物都能够恢复 生长。 方法适用性试验内容 （一）计数法适用性试验 （二）控制菌检验法适用性试验 微生物检验法适用性试验 （一） 计数法适用性试验 供试液制备  表面活性剂、中和剂或灭活剂：应证明其有效 性及对微生物的生长和存活无影响。  供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过 1小时。  供试液制备若需用水浴加温时，温度不应超过 45 ℃。  供试液的体积：100ml。 稀释剂： （1）0.1%无菌蛋白胨水溶液 （2 ）pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 （3 ）0.9%无菌氯化钠溶液  固体：10g 供试品+稀释剂至100ml  液体：10ml供试品+稀释剂至100ml 计数法适用性检查菌种选