组培设备与条件概述.docVIP

组培设备与条件 开展植物组织培养工作需要一个比较合理实用的场所，一套适宜的设备和提供必要的实验环境条件，这是首先要考虑到的。根据科学、合理的原则，一个较为理想的配置应该包括： 1、化学药品室 2、配培养基室 3、灭菌室 4、接种室 5、无菌培养室 基本仪器设备与用品 1、仪器设备 超净工作台、高压灭菌锅（手提式、立式或卧式）、小推车（可选）、精密电子天平（至少千分之一）、电子天平或托盘天平、酸度计、普通冰箱、烘箱、解剖镜、光照培养箱（选购）、电炉、微量可调移液器及配套吸嘴、移液管架、磁力搅拌器（可选）、不锈钢托盘、灌装机（可选）、培养架、定时器（控制光照时间）、紫外线杀菌灯、照度计（可选）、温湿度计（可选）蒸馏水器、摇床（可选）、针头滤器及配套滤膜 2、小型用品 枪镊，弯剪、解剖刀、接种盘 3、玻璃器皿 组培瓶（玻璃或塑料）、烧杯、量筒、移液管、试剂瓶、移液管架、容量瓶、试管、酒精、玻璃棒、滴瓶 4、组培药品 （详细药品请见常用配方） 5、其他 吸耳球、刷子、记号笔、定时钟、手套、封口膜、卫生药棉、拖鞋、口罩、白大褂、滤纸、洗瓶 培养条件 在植物组织培养中温度、光照、湿度等各种环境条件，培养基组成、 PH值、渗透压等各种化学环境条件都回影响组织培养育苗的生长和发育。 一、温度（temperature） 因为温度是植物组织培养中的重要因素，所以植物组织培养在最适宜的温度下生长分化才能表现良好，大多数植物组织培养都是在 23～27 ℃之间进行，一般采用 25±2℃。低于15℃时培养，植物组织会表现生长停止，高于35℃时对植物生长不利。但是，不同植物培养的适温不同。白鹤非的最适温度是20℃、月季是25～27℃、番茄是28℃。温度不仅影响植物组织培养育苗的生长速度，也影响其分化增殖以及器官建成等发育进程。如烟草芽的形成以28℃为最好，在12℃以下，33℃以上形成率皆最低。 不同培养目标采用的培养温度也不同，百合鳞片在30℃以下再生的小鳞茎的发叶速度和百分率比在25%以下的高。桃胚在2～５℃条件进行一定时间的低温处理，有利于提高胚培养成活率。用35℃处理草莓的茎尖分生组织3～５d，可得到无病毒苗。 二、光照（light） 组织培养中光照也是重要的条件之一，主要表现在光强、光质、以及光照时间方面： 1、光照强度（light intensity） 光照强度对培养细胞的增殖和器官的分化有重要影响，从目前的研究情况看，光照强度对外植物体、细胞的最初分裂有明显的影响。一般来说，光照强度较强，幼苗生长的粗壮，而光照强度较弱幼苗容易徒长。 2、光质（light wave） 光质对愈伤组织诱导，培养组织的增殖以及器官的分化都有明显的影响。如百合珠芽在红光下培养，8周后，分化出愈伤组织。但在蓝光下培养，几周后才出现愈伤组织，而唐菖蒲子球块接种15天后，在蓝光下培养首先出现芽，形成的幼苗生长旺盛，而白光下幼苗纤细。 3、光周期（light period） 试管苗培养时要选用一定的光暗周期来进行组织培养，最常用的周期是16h的光照，8h的黑暗。研究表明，对短日照敏感的品种的器官组织，在短日照下易分化，而在长日照下产生愈伤组织，有时需要暗培养，尤其是一些植物的愈伤组织在暗培养下比在光下更好。如红花、乌饭树的愈伤组织。 三、湿度（humidity） 湿度的影响包括培养容器保持和环境的湿度条件，容器内主要受培养基水分含量和封口材料的影响。前者又受琼脂含量的影响。在冬季应当适当减少琼脂用量，否则，将使培养基干硬，以致不利于外植体接触或插进培养基，导致生长受阻。封口材料直接影响容器内湿度情况，但封闭性较高的封口材料易引起透气性受阻，也会导致植物生长发育受影响。 环境的相对湿度可以影响培养基的水分蒸发，一般要求70%-80%的相对湿度，常用加湿器或经常洒水的方法来调节湿度。湿度过低会使培养基丧失大量水分，导致培养基各种成分浓度的改变和渗透压的升高，进而影响组织培养的正常进行。湿度过高时，易引起棉塞长霉，造成污染。 四、渗透压（penetrating pressure） 培养基中由于有添加的盐类、蔗糖等化合物，因此，而影响到渗透压的变化。通常1-2个大气压对植物生长有促进作用，2个大气压以上就对植物生长有阻碍作用，而5-6个大气压植物生长就会完全停止，6个大气压植物细胞就不能生存。 五、PH值 不同的植物对培养基最适PH值的要求也是不同的（见表），大多在5-6.5左右，一般培养基皆要求5.8，这基本能适应大多数植物培养的需要。 不同植物的最适PH值 种类 最适 PH 值 种