标准菌种的管理与传代程序.doc

姓名及职位 签 名 日 期 起草人 : 111 QC组MB 担当 复核人 : 11 QC组科长 批准人 : 11 质量管理部副部长 11 工厂长 变 更 历 史 变更号码 描 述 修改人 发行日期 新 C-0374 第一次改版 11 2001/11/14 C-0478 第二次改版 11 2003/5/26 1.0 目的 Purpose 标准菌种的管理与传代有一个比较规范的程序。 2.0 范围 Scope 上海11制药有限公司内的微生物实验室标准菌种的管理与传代。 3.0 适用文件 Applicable Document(s) 大肠杆菌检测标准操作程序〔ChP法〕 SMB-102 铜绿假单胞菌检测标准操作程序〔ChP法〕 SMB-103 金黄色葡萄球菌检测标准操作程序〔ChP法〕 SMB-104 沙门菌检测标准操作程序〔ChP法〕 SMB-105 大肠杆菌检测标准操作程序〔JP法〕 SMB-112 铜绿假单胞菌检测标准操作程序〔JP法〕 SMB-113 金黄色葡萄球菌检测标准操作程序〔JP法〕 SMB-114 沙门菌检测标准操作程序〔JP法〕 SMB-115 大肠菌群检测标准操作程序〔Sankyo法〕 SMB-122 铜绿假单胞菌检测标准操作程序〔Sankyo法〕 SMB-123 金黄色葡萄球菌检测标准操作程序〔Sankyo法〕 SMB-124 革兰氏染色标准操作程序 SMB-001 培养基的营养试验 SMB-011 培养基配制与管理标准操作程序 SMB－007 4.0 相关部门 Responsible Section(s) 质量管理部 5.0 物件准备 5.1 设备与仪器 接种环，生物安全柜，-80℃冷冻冰箱，恒温培养箱，高压蒸汽灭菌器，5℃ 冰箱，1ml菌种冷冻管，放菌种冷冻管的盒子，塑封袋，标明菌种名称、接种 日期及接种人的标签纸，1ml加样枪，烧杯，试管及配套硅胶塞，显微镜、水 浴锅 5.2 试剂及菌种 大肠杆菌、铜绿假单胞菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、枯草芽孢 杆菌、黑曲酶菌、10%甘油，灭菌生理盐水，革兰氏染色液、0.1%亚甲蓝液 （注：本公司购入的菌种标准分为ATCC和CMCC两种） 5.3 培养基 营养琼脂培养基，营养肉汤培养基、酪蛋白胨琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂 培养基、酵母霉菌琼脂培养基 6.0 操作步骤 6.1 10%甘油的制备： 将甘油配制成10%浓度的溶液，然后用1ml加样枪，将10%的甘油溶液加到 1ml菌种冷冻管中，盖上菌种冷冻管盖子，但不能将盖子拧紧。再将盖上盖子 的菌种冷冻管放入烧杯内进行121℃、30分钟高压蒸汽灭菌。灭菌结束后， 将烧杯中的菌种冷冻管放入生物安全柜内，拧紧盖子放入放菌种冷冻管的盒子 内，再将盒子放入5℃冰箱保存，备用。 标准菌种制备与管理 6.2.1 标准菌种冷冻管的制备（第一代） 将新购入的标准菌种在24小时内移入以上制备好的10％灭菌甘油 内。即从5℃冰箱取出已准备好的10%灭菌甘油菌种冷冻管置于生物 安全柜内，用冷却灭菌接种环从标准菌种斜面上挑取1～2个菌落接 种至10 %的灭菌甘油菌种冷冻管中，制成108的菌悬液，拧紧菌种冷 冻管的盖子放入相配套的塑封袋中，同时放入该菌的标签纸，再将放 有同一种菌的小的塑封袋放入一个较大的塑封袋中，放入－80℃带 锁的冰箱内。一般标准菌种在超低温冰箱内能保存5年，平均每年 每种菌用4支冷冻管，每三个月用一支冷冻管。 第二、三代工作菌种的制备： 6.2.2.1 从超低温冰箱中取出所需的菌种冷冻管，置于35～40℃的 水浴中进行