健脑补肾胶囊质量标准探究.doc

健脑补肾胶囊质量标准探究 　【摘要】 　　目的测定健脑补肾胶囊中桂皮醛的含量，制定健脑补肾胶囊的质量标准。方法采用高效液相色谱（HPLC）法测定健脑补肾胶囊中桂皮醛的含量。结果桂皮醛在7.70～38.5 μg/ml浓度范围内线性关系良好、精密度高、稳定性好、重复性符合要求，经加样回收率实验，桂皮醛平均回收率为99.00%，RSD为1.56%，表明该方法的准确度高。结论所研究的方法能较好地测出健脑补肾胶囊中桂皮醛的含量，并可用以有效控制健脑补肾胶囊的质量。 【关键词】 健脑补肾胶囊； 桂皮醛； 高效液相色谱法 　　本品来源于健脑补肾丸［1］，健脑补肾丸为中药保护品种，为更好地促进吸收，笔者研制了健脑补肾胶囊，并在制定其质量标准时增加了含量测定项。采用高效液相色谱法，对方中主要成分肉桂、桂枝进行含量控制。参照《中国药典》［2］2005年版Ⅰ部肉桂药材含量测定方法，建立高效液相色谱法测定本品中桂皮醛含量的方法。 　　1 仪器与试药 　　1.1 仪器AG-135型电子分析天平（梅特勒），高效液相色谱仪（LC-10AT），SPD-10Avp检测器，Maxsil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；乙腈-水（35∶75）为流动相；检测波长为290 nm；流速1.0ml/min；柱温25℃。 　　1.2 对照品桂皮醛（中国药品生物制品检定所，约2 ml， 710-9005）。归一化法测定，以5倍量标准浓度进样，本品纯度为99.23%。 　　1.3 试剂乙腈为色谱纯，水为自制重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。 　　1.4 样品由本实验室制备。 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件选择 　　2.1.1 检测波长选择精密称取桂皮醛对照品适量，加甲醇制成每毫升含15 μg的溶液，照分光光度法（《中国药典》2005年版Ⅱ部附录Ⅳ A），在波长200～400 nm的范围内扫描，结果波长为290 nm时桂皮醛有最大吸收。参照《中国药典》2005年版Ⅰ部肉桂含量测定项下色谱条件，因此选择290 nm作为桂皮醛的紫外检测波长。 　　2.1.2 流动相选择参照有关参考文献，初步选定乙腈-水作为桂皮醛含量测定流动相系统，经梯度洗脱遴选，最终确定乙腈-水（35∶75）为流动相。 　　2.2 样品处理条件的选择 　　2.2.1 提取溶剂选择取本品内容物约0.6 g，共3份，精密称定，置锥形瓶中，分别精密加入甲醇、乙醇、氯仿25 ml；称定重量，超声处理（120 W，40 kHz）30 min，取出，放冷，再称定重量，以同种溶剂补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。各吸取20 μl注入液相色谱仪，测定。结果以甲醇、乙醇处理样品时，桂皮醛含量无明显差异，但乙醇处理样品，提取物质较多，桂皮醛峰处有干扰，以氯仿处理样品，提取不完全，以甲醇处理样品，桂皮醛获得良好分离，故选择以甲醇作为提取溶剂。 　　　2.2.2 提取时间选择取本品内容物约0.6 g，精密称定，共3份，各置锥形瓶中，精密加甲醇25 ml，称定重量，分别超声处理20，30，40 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量。摇匀，滤过，取续滤液，即得。各吸取20 μl注入液相色谱仪，测定。结果表明，超声处理30，40 min桂皮醛含量无明显差异，桂皮醛基本提取完全，因此确定该样品超声时间为30 min。 　　2.2.3 供试品溶液制备取装量差异项下本品内容物约0.6 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇25 ml，称定重量，超声处理30 min，取出，放冷，再称定重量，以甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 　　2.3 线性关系的考察精密称取桂皮醛对照品20 mg（19.25 mg），置50 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；精密吸取5 ml，置25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，再分别精密量取 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml各置10 ml量瓶中，以甲醇稀释至刻度，作为对照品溶液，分别吸取上述对照品溶液，进样(20 μl定量环)，测定峰面积，记录色谱图在7.70～38.5 μg/ml浓度范围内，以色谱峰面积对样品进样浓度作曲线(见图1)。得回归方程为：Y=159 919x-14 402，r=0.999 9。 以上结果表明，在7.70～38.5μg/ml范围内，桂皮醛峰面积值与进样浓度有良好的线性关系。 　　2.4 阴性对照实验取不含肉桂和桂枝的阴性试制样品0.6 g，精密称定，同“供试品溶液制备”项下，同法处理后，制得阴性对照液，分别取阴性对照液、供试品溶液、对照品溶液各进样20 μl，记录色谱图。 结果表明，在阴性对照图谱中，桂皮醛峰处无干扰。 　　2.5 精密度实验取桂皮醛对照品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，连续进样6次，峰面积积分值的RSD为0